Ротация блад дк: Страница не найдена

Блад ДК танк 3.3.5 ПвЕ гайд | ДК ветки кровь 3.3.5

Блад дк — отличный танк, который прекрасно держит агро, выдает большой ДПС, а также обладает самоисцелением. Среди игроков ходит много споров о том, в какой же ветке лучше танковать, ведь в любой из трех веток есть таланты на увеличение брони, уклонение и уменьшение входящего урона, но у танка в ветке кровь самое большое преимущество — выживаемость, за счет талантов самоотхила.

Выбор расы для блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Альянс

Дренеи — расовый рейтинг меткости в 1% позволит сделать уклон в камни и наложение чар на другие характеристики, это сильный ПвЕ бонус для танков ДК, поэтому эта раса является лучшей в выборе за Альянс. Остальные расы на свой выбор.

Орда

Таурены — приятный бонус в размере 5% к стамине полезен, лучший выбор;
Тролли — расовая берса троллей является хорошим бурстом для горгульи, используется перед ее призывом, так как горгулья берет характеристики персонажа в момент призыва;
Орки — расовый берсерк, который увеличивает АП на 322, специальность на топорах увеличивает наше мастерство, а также прислужники наносят на 5% больше урона.

Характеристики блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Защита — важная характеристика, которую необходимо поднять до 540 единиц, собирается в первую очередь, чтобы избежать критических ударов от боссов;
Выносливость — вторая важная характеристика, капа не существует, чем больше, тем лучше;
Меткость — кап равен 8%, так как блад дк танчат с двуручным оружием;
Мастерство — необходимо собрать 26 единиц данной статы, чтобы босс не мог уклоняться от наших ударов или парировать их;
Броня, парирование, уклонение — собирается со шмота, специально акцентироваться на данных статах нет смысла.

Билд для блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Так как каждая ветка ДК содержит полезные для танкования таланты, расстановка выглядит следующим образом:

Теперь о взятых талантах подробней:

Клинковая ограда — снижает входящий урон на 5%;
Клинковая броня — подымает вашу силу за счет брони;
Запах крови — предоставляет нам постоянный источник рун;
Специализация на двуручном оружии — урон от двуручного оружия будет больше;
Захват рун и Улучшенный захват рун — полезная хилка;
Мрачная решимость — увеличивает рейтинг крита;
Отражение заклинаний — с вероятностью процентов 20 можно отразить почти половину летящего урона;

Кровавые удары — увеличения урона от способностей Кровавый удар, Удар в сердце и Вскипание крови;
Ветеран Третьей Войны — увеличивает танковские статы;
Кровавая метка — когда вас бьют, то одновременно и хилят, как то так;
Сила поганища — увеличивает силу атаки участников рейда на 10% и вашу силу на 2%;
Истерия — бафф для дд;
Великая власть крови — увеличения отхила и выносливости;
Усиленный удар смерти — увеличение урона от способности на 30% и на 50% отхил;
Кровь вампира — способность для отхила.

Ветки Лед и Нечестивость:

Крепость — увеличение брони и снижение время действия замедлений;
Болезнетворность — увеличивает шанс попадания и увеличение агро;
Предчувствие — добавляет 5% к уклонам;
Болезненность — плюс к агро;
Ненасытный мертвец — увеличение силы и + к агро;
Ночь мертвецов — уменьшает кд на толпу мертвецов. Это спасательный круг, ибо мертвецы перебирают почти половину урона на себя.

Ротация блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Все спасательные заклинания применяйте с умом, к примеру, на Ребраде бывает момент, когда первый хил в шипе, второй отхиливает первого и вас получается хилить некому. Не ждите пока здоровье опуститься ниже плинтуса. Если хил находится в шипе – прожимаем кровь вампира и по ситуации захват рун. В остальном, когда видно, что сейчас рейд ляжет, начинайте прожимать спасательные абилки постепенно – это поможет хилам восстановить рейд не отвлекая внимание свое на танка.

Ротация для улучшенного агро

Эта ротация предназначена для одного моба или босса. Если бьем одного моба, то третий и четвертый пункт пула заменяем на вскипание крови. При использовании этого типа ротации вам будет очень необходим символ ледяного прикосновения. Если босса валят бешеные ДД, то постоянно юзаем кровоотвод по КД.

Ротация на большую выживаемость

Данная ротация рассчитана полностью под символ болезни. Все будет заключаться в том, что вы постоянно будете отхиливаться при помощи удара смерти. Но при этом на цели должна висеть болезнь, иначе отхила не будет. Что бы болезнь постоянно продлевать не тратя руны льда, тратим руны крови на мор, который будет с символом болезни постоянно обновлять время общего действия болезни.

АОЕ ротация

Здесь назначение всех рун очень строго расписано, и возможности на ошибку просто нет. Начинаем ротацию с Ледяного прикосновения, этим мы возьмем необходимое агро, чтобы ДД не сорвали его после первого удара. Потом бросаем лужу и сразу удар чумы, затем следует мор с разбросом по пачке болезней. На основную вашу цель бросаем кровоотвод и тратим руну смерти для ледяного прикосновения для мощного агро. Потом на каждый цикл в ротации используем одну руну крови на мор для обновления болезней, одну руну на вскипание крови, две ледяные руны на ледяное прикосновение, две анхоли руны на удар чумы, который даст на цель основную дополнительное агро. Необходим символ ледяного прикосновения.

Способности блад дк 3.3.5 ПвЕ

Способности для увеличения агро

Ледяное прикосновение – лупит магией, генерирует отличное агро, накладывает озноб, который выделяет дополнительное агро;
Рунический удар – последующий удар в ближнем бою принесет дополнительный урон и сгенерирует хорошее агро. Используем всегда по КД и по силе рун;
Смерть и разложение – выделение большого количества агго и лупит по многим целям. Совместно с символом увеличивает ваше агро на 20%;

Темная власть – это таунт, который будет постоянно заставлять противника вас атаковать. Начинать пулл с нее не рекомендую. Используется только при срыве агро;
Хватка смерти – этот таунт предназначен исключительно для мобов. Притягивает одного из них к вам и заставляет 3 секунды вас атаковать.

Способности для нанесения урона

Удар чумы – это слабый удар, который способен наложить на противника кровавую чуму;
Мор – не наносит дамага, но способен распространить болезнь на все окружающие вас цели;
Вскипание крови – мочит все цели в округе. Если на цель наложен болезнь, то дамаг увеличивается;
Удушение – в инсте заставит замолчать моба и направит в мили радиус.

Способности для увеличения выживаемости

Удар смерти – наносит хороший урон. От этого удара Блад ДК отхилится примерно на 9% от общего ХП, при этом выделяя немного агро;
Антимагический панцирь – щит который поглощает магию. Полезная штучка в ЦЛК и в Склепе;
Захват рун – с вкачеными талантами и вставленным символом отхиливает танка н 40% от общего показателя ХП;
Кровь вампира – если стоит символ, то на 15 секунд поднимает ХП на 15 процентов от общего показателя. Можно использовать по КД и в критические моменты;
Войско мертвых – во время его призывов входящий дамаг снизится на 50 процентов. Не выделяет аггро, но помогает вынести противника;

Воскрешение мертвых и смертельный союз – в бою воскрешаем своего вурдалака и жертвуем им сразу в пользу шестидесяти процентам к увеличению общего ХП.

Чарки для блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Сокеты для блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Символы для блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Большие символы:

Символ болезни – при использовании способности «Мор» время действия болезней и их вторичных эффектов на цели обновляется;
Символ захвата рун – захват рун восстанавливает вам на 10% здоровья больше и излечивает участников вашей группы на 10% от общего запаса их здоровья;
Символ крови вампира – продлевает действие заклинания Кровь вампира на 5 сек.

Малые:

Horn of Winter (Символ зимнего горна)

Glyph of Raise Dead (Символ воскрешения мертвых)

Glyph of Pestilence (Символ мора)

Бис шмот для блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Набор т10 из пяти вещей:

Остальные Bis вещи:

Триньки стоит разобрать более подробно, так как для определенных инстов необходимы определенные аксессуары.

В ЦЛК лучшим выбором будет Безупречный клык Синдрагосы, Жизненная сила владыки мира и Неизвестный орган.

Для остальных инстов подойдет Безупречный клык Синдрагосы, Жизненная сила владыки мира, Неизвестный орган с Монета на удачу. Монета на удачу не подходит для ЦЛК, так как в данном подземелье вешается дебаф на -20% к уклонению.

Профессии для блад ДК танка 3.3.5 ПвЕ

На Личе в принципе все профессии сбалансированы, но самые полезные на мой взгляд для анхолика следующие:

Ювелирное дело — камни (3 камня), которые может вставить в сокеты только ювелир: — считаю лучшим выбором;
Наложение чар — прокачав эту профессию вы получите возможность наложить чары на кольца со стаминой;
Кузнечное дело — кузнечка позволит создать 2 бесцветных слота под сокеты в перчатках и запястьях;
Горное дело — даст постоянный баф на здоровье.

Гайды по профессиям 3.3.5 вы можете посмотреть на нашем сайте.

Еда и фласки для блад дк танка 3.3.5 ПвЕ

Макросы дк танка 3.3.5 ПвЕ

Макрос на рунический удар:

На место «Способности»» впишите способность, которую используете. Сделайте такой макрос для каждой абилки. Данный макрос лучше использовать для ударов в мили, часто используется для Удара чумы и для Удара в сердце.

#showtooltip Способность
/script UIErrorsFrame:Hide()
/cast Способность
/cast !Рунический удар
/script UIErrorsFrame:Clear()
/script UIErrorsFrame:Show()

Макрос для использования болезней:

#Showtooltip
/castsequence reset=combat/target/6 Ледяное прикосновение, Удар чумы, Мор
/startattack [harm]

Аддоны для блад дк 3.3.5 ПвЕ

Omen Threat Meter – следит за агро и предупреждает о возможном его срыве с танка. Без этого аддона в хорошем шмоте ходить в рейды не советую, так как воин является одним из топовых ДПСеров, легко срывающих агро;
Deadly Boss Mods — помимо выдачи максимального ДПС фури варом, необходимо отслеживать различные фазы и заклинания боссов, этот аддон будет вашим штурманом при прохождении инстов и его наличие как минимум требует большинство РЛов;
BloodShieldTracker — контроль за состоянием ДК под щитом крови;
Recount или Skada — замеряют нанесенный урон в босса, захил рейда и имеют в своем арсенале много полезных статистик боя. Этот аддон вас не раз порадует в рейдах и позволит похвастаться перед остальными своим большим топором;
CLC DK – аддон помогает с ротацией;
GearScore 3.3.5 — Аддон GearScore 3.3.5 поможет рассчитать уровень гира, он очень удобен и не требует каких либо настроек;
ComeHere – Великолепное звуковое сопровождение всех действий;
MagicRunes – классно меняет вид панельки;
nibRunes – новейшая панелька для рун;
RuneWatch – наибеле удобная панель с рунами;
Get Over Here – изюминка среди аддонов для ДК.

таланты, статы, ротация, снаряжение, зачарки

Цель данного руководства — познакомить игроков с таким классом как Рыцарь Смерти в спеке кровь. Информация пригодится тем, кто достиг 80-го лвла. Изучив гайд, удастся стать одним из нужных персонажей в рейдовых подземельях высокой сложности.

Знакомство с классом

Для полного освоения класса потребуется провести много часов за прокачкой героя. Понять механику поможет лишь практика, чьей главной целью является тестирование способностей, что позволит определить правильность выполнения того или иного таланта.

Специализация Кровь – одна из тех вариантов игры, где приходится сконцентрироваться на сражении с одной или несколькими врагами. После приобретения достаточных знаний Рыцарь Смерти сможет переключиться на Нечестивость и Лед. Есть возможность совмещать несколько вариантов проведения боев, для уничтожения одиночных целей идеальным станет спек Кровь. Для нанесения урона по большому количеству недоброжелателей подойдет Нечестивость, с чьей помощью имеется шанс выдать огромный ДПС за счет АОЕ-атаки.

Если только начинаете за ДК, и желаете немного подготовиться, тогда лучшей станет именно специализация Кровь.

Будьте готовы к тому, что не увидите высокий ДПС по цели, зато заметите, как герой умеет бурстить. Если же не нравится наблюдать низкие показатели по урону, и высокие значения – главный фактор, тогда нужно выбрать другой спек.

Отличительная особенность Крови — невероятно большое количество дамага при бурсте (не обойтись без зелья скорости и различных тринек).

Что касается того, какую пользу принесете пользу рейдовой группе, то ее не так много, как хотелось бы. Это существенный недостаток для ДК, играющих в спеке Кровь. Отсутствуют какие-либо выгодные баффы, кроме Силы поганища, но не стоит печалиться, поскольку положительные эффекты удастся получить от других игроков. Блад ДК должен забыть про проки способностей, вместо этого следует сосредоточиться на атаке одиночной цели.
Положительным моментом станет присутствие нескольких Рыцарей Смерти, один из которых должен спекнуться в Нечестивость.

Билд блад дк 3.3 5 пве

Стандартный билд Блад ДК, здесь удастся получить высокий потенциал в пробивании брони, и показатель составляет 90%. Подобное достигается хорошо одетым рыцарем, но никак тем игроком, у которого низкий ГС, поэтому позаботьтесь о достойной экипировке.

Болезненность необходимо вкачать на 2/3 только потому, что нет другого альтернативного таланта.

Приоритетные статы блад дк 3.3 5 пве

Хит является наиболее важной характеристикой на более низких уровнях экипировки. Это вдвое больше для Блад ДПСеров.

Ротация не отличается разнообразием, но в любом случае нельзя допускать многочисленных промахов, иначе потеряете надежду на получение хоть какого-либо ДПС.

Лишь после достижения предельного значения рекомендуется обратить внимание на другие характеристики. Кап хит составляет 8%, или 263 рейтинга попаданий. Это значение не такое высокое по сравнению с определенными талантами ветке Нечестивость, поэтому можете на свое усмотрение выбирать наиболее эффективные способности. Эти таланты не касаются тех случаев, когда происходят промахи при атаке, и нужно будет получить рейтинг 263.

Когда речь идет об уклонении и парировании, заметите еще одну характеристику — Мастерство. Здесь также необходимо собрать предельное значение, которую все игроки хотят получить, в основном потому, что придется атаковать большинство боссов сзади.

Боссы не в состоянии парировать сзади, они могут только увернуться.
Старайтесь побыстрее достичь капа мастерства, чье значение составляет 6,5% или 26 мастерства или 214 рейтинга мастерства. Два последних понятия сильно отличаются друг от друга.
Мастерство будет в основном набираться из талантов, тогда как рейтинг мастерства достигается благодаря экипировке. За каждые 8 или около того очков рейтинга, которые получаете, добавляется 1 мастерства. Попытайтесь запомнить нюанс, он станет ключом к тому, чтобы целям не удалось увернуться от ударов, тем самым исключается вероятность потерять драгоценное время на повторную атаку и прервать ротацию, где используются руны.

Скорость — это то, на что взглянете сразу же, если под рукой не окажется других чар, надеваемых на героя, таких как плащ с инчантом плащ Скорость или Ловкость.
Если нет плаща, то скорость бесполезна. Единственное, для чего может это понадобиться — замена отсутствия хита, но если не набрали предельного значения, забудьте о других характеристиках.

Сила — самый важный показатель.

Необходимо сделать все возможное, чтобы «нарастить» высокое значение. Для этого пригодится драгоценный камень (даже, если он не соответствует цвету сокета).
WotLK не имеет эквивалентных чар Силе атаки/Сила.
Отчего же нужно Рыцарю Смерти стремиться к увеличению силы, и стараться набирать, как можно большее значение? За 1 силу мы получаем 2,2 Силы Атаки (специализация Крови), после того, как баффы в рейде (Благословение Королей, Знак дикой природы и подобное) достигают 2,6 Силы Атаки/Сила, что приводит к невероятному количеству Силы Атаки и, более того, специальному ходу сила удара. Это почти богоподобно.

Пробивание брони бесполезно на более низких уровнях экипировки, поэтому нет нужды сейчас обсуждать это.

Что касается статистики, это то, на что мы смотрим в первую очередь. Единственное, что можете постараться зароллить для DK это шею роги, но это только в том случае, если новая вещь значительно превзойдет текущее значение. Ловкость помогает критовать, правда, слишком акцентироваться на данном стате не нужно.

Ротация блад дк 3.3 5 пве

Начало боя:

Сама ротация выглядит следующим образом:

Болезни обновляются с Мором благодаря символам. К сожалению, Рыцарь Смерти в ветке Кровь не эффективен, пока не достигнет 90% пробивания брони (+ 10% от талантов).

Army of the Dead (Войско мертвых) — используется за несколько секунд до боя или при смене фазы. Применение способности во время выполнения комбо приведет к потере ДПС и к нарушению ротации. Хит, Сила Атаки, Скорость удваиваются в процессе призыва прислужников.
Истерия – используется по КД, что позволит ворваться в список ТОП-ДПС в рейдовой группе.

Символы блад дк 3.3 5 пве

Большие символы

Glyph of Dark Death (Символ черной смерти).

Glyph of Disease (Символ болезни).

Glyph of Death Strike (Символ удара смерти).

Glyph of Dancing Rune Weapon (Символ танцующего рунического оружия).

Малые символы

Horn of Winter (Символ зимнего горна).

Glyph of Raise Dead (Символ воскрешения мертвых).

Glyph of Pestilence (Символ мора)/

Эквип блад дк 3.3 5 пве

Представлен контрольный список снаряжения, которое добываются, как из подземелий, так и благодаря ремесленным профессиям.

Голова:

Sanctified Scourgelord Helmet (Освященный полный шлем повелителя Плети) — торговцы.

Запястья:

Malykriss Vambraces (Тяжелые наручи Маликрисса) — Начальник кузни Гархлад, Яма Сарона.

Bracers of the Heir (Наручи наследника) — Халион, Рубиновое святилище.

Кисти рук:

Sanctified Scourgelord Gauntlets (Освященные рукавицы повелителя Плети) — торговцы.

Ступни:

Grinning Skull Boots (Сапоги скалящегося черепа) — Залы Отражений.

Apocalypse’s Advance (Приближение Апокалипсиса) — Халион, Рубиновое святилище.

Плащ:

Tapestry of the Frozen Throne (Гобелен Ледяного Трона) — Залы Отражений.

Winding Sheet (Развевающийся саван) — Гниломород, ЦЛК.

Грудь:

Sanctified Scourgelord Battleplate (Освященный боевой доспех повелителя Плети) — продавцы.

Шея:

Painfully Sharp Choker (Мучительно острое колье) — Повелитель Плети Тираний, Яма Сарона.

Penumbra Pendant (Подвеска полутени) — Халион, Рубиновое святилище.

Плечи:

Sanctified Scourgelord Shoulderplates (Освященные латные наплечники повелителя Плети) — торговцы.

Пояс:

Bent Gold Belt (Свитый золотой пояс) — Ик — Прислужник Крика, Яма Сарона.

Coldwraith Links (Узы хладного духа) — Ларь Сноходицы, Цитадель Ледяной Короны.

Ноги:

Sanctified Scourgelord Legplates (Освященные ножные латы повелителя Плети) — торговцы доспехами.

Legplates of Aetheric Strife (Ножные латы небесного раздора) — Синдрагоса — Королева ледяных драконов, ЦЛК. Если используете Глоренцельг, священный клинок Серебряной Длани.

Кольцо 1:

The Lady’s Promise (Обещание Госпожи) — Залы Отражений.

Ashen Band of Endless Might (Пепельное кольцо безграничной мощи) — выполнение квестового задания Перемены в душе.

Кольцо 2:

Bloodshed Band (Кольцо кровопролития) — продавцы.

Might of Blight (Сила Гнили) — Тухлопуз, ЦЛК.

Тринька 1:

Banner of Victory (Знамя победы) — Ларь исповедницы, Испытание чемпиона.

Sharpened Twilight Scale (Заостренная сумеречная чешуя) — Халион, Рубиновое святилище.

Тринька 2:

Mark of Supremacy (Знак превосходства) — торговцы, награды за эмблемы Триумфа.

Deathbringer’s Will (Воля Смертоносного) — Ларь Смертоносного, Цитадель Ледяной Короны.

Оружие:

Tyrannical Beheader (Тиранический главорез) — Повелитель Плети Тираний, Яма Сарона.

Shadowmourne (Темная Скорбь) — выполнение одноименного квеста.

Glorenzelg, High-Blade of the Silver Hand (Глоренцельг, священный клинок Серебряной Длани) — Лич Кинг, ЦЛК.

Реликвия:

Sigil of Virulence (Печать болезнетворности) — продавцы, награды за эмблемы Триумфа.

Sigil of the Hanged Man (Печать повешенного) — продавцы, награды за эмблемы льда.

Зачарки блад дк 3.3 5 пве

Голова:

Arcanum of Torment (Магический знак страданий) — герцогиня Минкс — Интендант Черного Клинка.

Наплечники:

Greater Inscription of the Axe (Великое начертание секиры) —

Плащ:

Greater Speed (Свиток чар для плаща — скорость II).

Major Agility (Свиток чар для плаща — ловкость V).

Нагрудник:

Powerful Stats (Свиток чар для нагрудника — все характеристики VII).

Наручи:

Greater Assault (Свиток чар для наручей — штурм II).

Перчатки:

Crusher (Свиток чар для перчаток — крушитель).

Пояс:

Eternal Belt Buckle (Извечная поясная пряжка).

Поножи:

Icescale Leg Armor Накладки для поножей из ледяной чешуи).

Обувь:

Tuskarr’s Vitality (Свиток чар для обуви — живучесть клыкарра).

Greater Assault (Свиток чар для обуви — штурм II).

Оружие:

Rune of the Fallen Crusader (Руна павшего рыцаря).

Камни блад дк 3.3 5 пве

Мета:
Relentless Earthsiege Diamond (Алмаз жестокого землеправителя).

Красный сокет:
Fractured Cardinal Ruby (Растрескавшийся багровый рубин).

Желтое гнездо:
Inscribed Ametrine (Покрытый письменами аметрин).

Синий сокет:
Nightmare Tear (Слеза кошмаров) x1.

Профессии блад дк 3.3 5 пве

Лучшие профессии — ювелирное дело и кузнечное дело .

В первом случае игрок получит 3 штуки уникальных драгоценных камня Растрескавшееся Око дракона.

Второй вариант — 2 дополнительных слота для драгоценных камней (для запястий и кистей рук).

Расходные материалы блад дк 3.3 5 пве

Еда:

Dragonfin Filet (Филе дракоперой рыбы-ангела).

Hearty Rhino (Сочное мясо люторога).

Свитки:

Scroll of Strength VIII (Свиток силы VIII).

Эликсиры:

Flask of Endless Rage (Настой бесконечной ярости).

Зелье:

Potion of Speed (Зелье быстроты).

Indestructible Potion (Зелье несокрушимости).

Макросы блад дк 3.3 5 пве

Используйте макрос со всеми способностями, просто вместо Heart Strike впишите то, что хотите применить.

#showtooltip Heart Strike
/cast Heart
/cast !Rune Strike

Макрос Истерия (лучшее время для использования — после первого Смертельного удара).

#showtooltip Hysteria
/cast Hysteria
/cast Blood Fury
/use Potion of Speed
/cast Horn of Winter

Когда соберете весь комплект БИС-шмота сможете занять лидирующую позицию в рейтинге ДПСеров, наносящих урон по одиночной цели.

Гайд по Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ

Несмотря на то, что в WoW Рыцарь Смерти как персонаж появился относительно недавно, популярности у него уже выше крыши. Вы спросите почему? Да потому что ДК имеет хорошую защиту и множество первоклассных фишек для нанесения урона. В ПвЕ особо важным является момент нанесения максимального урона. Чем больше рейдовый дамаг, тем быстрее выносится противник, поэтому сегодня Блад ДК мы будет рассматривать в этом гайде в качестве ДД. Мы расскажем вам как в Блад ветке можно наносить стабильный максимальный урон, причем достаточно высокий и конкурентно способный. Итак, Гайд по ДД Блад ДК 3.3.5 ПвЕ – погнали!

Гайд по Анхоли ДК 3.3.5 ПвЕ Гайд по Фрост ДК 3.3.5 ПвЕ

Гайд по Блад ДК 3.3.5 ПвЕ — танк

Содержание гайда:

Как для Блад ДК в ДД правильно выбрать расу

Если честно, то выбор среди Орды и Альянса совершенно ничтожный. Для ПвП возможно есть варианты неплохие, но для ПвЕ это только Орки в Орде. Объясняется это легко: Орки имеют все необходимые бонусы для увеличения урона. Для Блад ДК в ПвЕ это то что нужно.

— Оки имеют расовый бонус «Берсерк», который изначально дает 322 в АП. Это более чем отлично!

— Способность «Мастерство» — увеличивается вместе со специализацией топоры. Да и вообще Орк с двумя топорами выглядит достойно в инсте.

Лучшие аддоны для Блад ДК

— У Орка все прислужники будут иметь повышенный урона на 5 процентов. Это уже более приоритетный бонус в отличие от сайленса.

Если за Орду вам играть не в кайф, то в качестве персонажа вы можете выбрать Дренея. Это наиболее приемлемый выбор, но он все равно проигрывает во многом Оркам. Среди Орды можно еще рассмотреть для Блад ДК и Тролля, но это только если Орки вас чем то не устраивают.

Характеристики для Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ

Меткость – необходима для того, чтобы каждая желтая атака Блад ДК долетела до противника. Прокачивается до капа в первую очередь и только потом смотрим в сторону остальных характеристик.

Мастерство – идеальный показатель для Блад ДК в качестве ДД будет в 6.5 процентов. Это позволит снизить у противника его показатели ловкости. Он уже на 100 процентов не сможет увернуться от ваших ударов.

Аддоны для ПвЕ Аддоны для ПвП

АРП – это самый профитный стат для Блад ДК после набора первых двух. Сразу возникает вопрос: а почему так? – Все очень просто: вся мощь ДК заключена в уроне от физической природы. Все камни, чарки можно брать по возможности на АРП. Это не ПвП, где нам нет необходимости в показателе устойчивости. Желательно показатель дотянуть до 90 процентов. Остальные 10 процентов Блад ДК ДД получит с взятием таланта «Кровопийца».

Критический удар – вся сила нашего Рыцаря Смерти в ветке «Кровь» заключается именно в крите. И его ценность будет постоянно возрастать с более крутым обвесом. Крит просто великолепен, благодаря таланту «Сила Могрейна».

Билд для Блад ДК 3.3.5 ПвЕ

В качестве ДД, Блад ДК будет иметь два варианта билда. Это обусловлено тем, что на некоторых боссах в ЦЛК вам необходимо будет больше выживаемости, а где то больше дамага.
В первом варианте мы рассмотрим билд с выживаемостью на таких боссах как: Ланатель, Синдрагоса или Лич. В билде мы прокачаем «Кровь вампира» это необходимо, чтобы улучшить самоотхил.
Еще я наблюдал, что многие ДД Блад ДК в ПвЕ вкачивают талант «Запах крови». Он помогает увеличить РП и Силу рун но только в те моменты, когда по вам проходят удары ближнего и дальнего боя в моменты АоЕ.

Следующий вариант билда подойдет в тех случаях для Блад ДК ДД ПвЕ, когда на сервере не совсем корректно работает Танцующее руническое оружие. Это может выражаться в нанесении совсем слабого урона. Даже несмотря на то, что каждый игрок который бегает в ПвЕ за Блад ДК 3.3.5 в качестве ДД собирает РПБ, несмотря на уже имеющиеся неплохие показатели в данном направлении. Это будет влиять на дополнительный дамаг от наших Петов. Так как все свои характеристики Пет берет именно от своего хозяина.

Анхоли ДК 3.3.5 ПвП

В результате ваш Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ получит все что необходимо для мощного нанесения урона и удержания его на одной планке в процессе всего боя.

Сокеты для Блад ДК 3.3.5 ПвЕ

Здесь есть два варианта событий. Если у вас уже рейтинг пробивания брони достиг 90 процентов, то можно красные камни вставлять на силу.

Если бонус от шмота вам не играет роли, то желательно ставить во все сокеты камни на АРП. При наличии капа, ставим строго на увеличение силы.

Лучшие макросы для Рыцаря Смерти

В желтые сокеты втыкаем камни на меткость, так как стат так же важен. Если есть кап, то вставляем на АРП.

В качестве мета сокета лучшим вариантом будет «Алмаз жестокого землеправителя».

Наложение чар для Блад ДК ДД в ПвЕ 3.3.5

Ротация Блад ДК ДД в ПвЕ 3.3.5

У Блад ДК ротация может отличаться причем существенно. Все будет зависеть от того, с каким символом вы предпочитаете играть в ПвЕ. Обычно это либо «Танцующее руническое оружие», или же «Символ болезни». Если вы предпочитаете ставить первый символ, то ротация Блад ДК в ПвЕ будет следующей:

После пулла вы должны включить свою истерию и сразу же в босса отправляем «Ледяное прикосновение». Далее нам необходимо навесить свои дебафы. Делаем это с помощью «Удара чумы» и закрываем первую позицию Ударом Смерти. Далее дважды прожимаем «Удар в сердце», следом «Зимний горн» и пускаем в расход Танцующее оружие.

Лучшие приколы WoW

После этого всего в идеале все ваши дебаффы должны быть на противнике. Делаем несколько завершающих па: наносим «Удар смерти», трижды тиснем на «Удар в сердце» и завершаем композицию Ликом смерти. Далее все должно идти сначала в той же последовательности. Если ротация прервется или же вы прожмете не то заклинание, то уже последовательности не получится.
Самое сложное для Блад ДК как ДД – это уследить, чтобы все болезни и дебафы висели на боссе. В этом случае лучше использовать грамотные аддоны для ДК. Так же есть несколько вариантов в выборе среди аддонов для ПвЕ.

Есть еще такое понятие, как ротация Блад ДК в АоЕ боях. Здесь уже тактическое направление немного будет меняться. Зачастую, крутое ДПС можно выдавить из Рыцаря Смерти если четко соблюдать следующие последовательности в заклинаниях. Начинаем АоЕ бой со следующей последовательности:

Как только все провели успешно, то сразу начинаем основную АоЕ ротацию и ее уже гоняем по кругу. Последовательность заклинаний выстроена так:

Все что вам необходимо для выбивания максимального ДПС – это четкое соблюдение действий описанных в ротации. Блад ДК как ДД уникален еще и теми моментами, что сам по себе персонаж немного багнутый и имеет несколько секретов, о которых чуть ниже.

Секреты и нюансы ДПС Рыцаря Смерти «Кровь»

— Первое, что можно сказать, так это изучите позиционирование в инстах. Необходимо знать такие точки, где вам не придется много перебегать. В результате провалов по дамагу не будет и вы будете в рейтинге занимать всегда первые строчки по урону.

— Блад ДК имеет возможность призывать Вурдалака. Делать это необходимо обязательно перед тем, как произойдет пулл. Наше «Войско мертвых» наиболее эффективно себя покажет на Саурфанге, Профессоре и Синдрагосе. После его вызова вы немедленно должны откатить все руны.

На Саурфанге лучше всего призывать войско мертвых в момент, когда он поднимет свой топор вверх и начинается вся тряска.

Аддоны для Рыцаря Смерти

На Синдрагосе после того как сольётся второй дракон, вам необходимо взбежать на лестницу и на второй или третьей бомбе можно выпускать свое войско.

— Если вы проспали обновление ваших или же вас в этот момент откинуло или еще что ни будь произошло и доты вы не обновили, то это не проблема, если в рейде есть еще ДК и его Доты в данный момент работали. Вам просто необходимо прожать Мор и все доты опять повиснут на цели. Для этого необходимо обязательно иметь символ на Мор.

— ДК в арсенале имеет «Вскипание крови». Это заклинание желательно использовать в те моменты, когда выбегает много мобов. В результате вы сможете апнуть себе ДПС. На пиратках часто наблюдал, что Скорбь от нашего разложения стакается от каждого моба. В результате получается в момент когда выбегают адды у Блад ДК просто сумасшедшее ДПС.

— Есть такой бак на пиратках, что если вы прокачали инженерку и слепили себе на руки Гиперскоростные ускорители, то после сброса профессии их все равно можно юзать. Это круто!

Символы для Блад ДК (ДД) 3.3.5 ПвЕ

Вначале давайте разберем символы, которые будут обязательными для Блад ДК в качестве ДД. Именно с этими символами связаны наши билды и соответственно заточена ротация. Только с качественной расстановкой символов вы четко сможете провести всю тактическую цепочку заклинаний.

«Символ удара смерти» — так как нам необходим в первую очередь хороший дамаг, то данный символ будет постоянно увеличивать урон от удара смерти – а это то, что ДК необходимо как ДД игроку.

Макросы для ДК

«Символ болезни» — вы сможете легко обновлять все болезни на противнике. Делается это путем нажатия на «Мор».

«Танцующее руническое оружие» — является третьим наиболее подходящим символом.

Все символы отлично будут вписываться в работу первого билда. Для второго же мы подобрали другие символы, так как там суть игры и стратегия будут немного изменены. Нам необходимо заменить танцующее оружие на «Символ вурдалака» для призыва войска вурдалаков. Для чего это делается в инсте – описано в ротации.

Как пользоваться печатями Блад ДК 3.3.5 ПвЕ

В арсенале Рыцарь Смерти имеет на выбор две печати:

— «Печать болезнетворности» — имеет достаточно частый прок, но не стопроцентный, при этом увеличивает силу Блад ДК на 200 единиц.

— «Печать повешенного» — работает несколько иначе. Прокает всегда – имеет стопроцентный прок. Может до трех раз стакаться, что в сумме дает Блад ДК увеличение силы на 220 единиц. Наиболее удобно использовать в ПвЕ именно первую печать, так как бывает довольно сложно настакать в бою три стака, так как бывает, что необходимо постоянно перемещаться. В результате, пытаясь настакать вторую печать и этого не выходит – идет уже потеря ДПС, поэтому первая печать более приоритетна.

Выбор профессии для Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ

Момент важный, так как каждая профа дает свои бонусы и при неправильном выборе вы получите совершенно не то, что вам необходимо. Так как наш Блад ДК играет роль ДД в ПвЕ, поэтому для него в первую очередь будут более приоритетны бонусы, которые дают именно рейтинг пробивания брони, так как наш Гайд по Блад ДК ДД в ПвЕ разработан именно на этом показателе и все вокруг него вращается.

— Ювелирное Дело – это первая профа, которая должна быть обязательно прокачана. В итоге вы получите к рейтингу АРП – 102 единицы. Если же у вас этот рейтинг уже прокачан до капа в 90%, то профа даст вам 102 единицы к силе.

— Кузнечное дело – это вторая профа, которая способна дать вам еще 40 единиц к показателю АРП. Если кап уже набран, то вы получаете до 40 единиц к силе, два дополнительных слота под сокеты, а так же возможность вставить камень на +10 ко всем характеристикам Блад ДК ДД ПвЕ.

Остальные профессии не имеют бонуса к АРП, поэтому если вам приглянулось что то другое – решать вам. При этом не забывайте, что как ДД вы немного потеряете.

Как одеть Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ

По шмоту возникает множество споров, но при этом все стремятся к одному – это заполучить шмот более высокого уровня. Я хожу в обвесе, что показан на скрине. В инстах мне комфортно, так как я имею не только хороший показатель ХП, но и достаточную мощь, чтобы показать высокий уровень ДПС.

Сам по себе Блад ДК ДД – персонаж уникальный, так как он отлично защищен и при этом наносит весомый урон по боссу. Многие за это и полюбили донного персонажа. Мы старались написать данный гайд по Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ простым и доступным языком для новичков, которые стоят на пути своего начинания этого нелегкого пути. Много еще есть нераскрытых нюансов и возможностей, которые начинаешь понимать только с опытом игры. Поэтому Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ – это постоянное совершенство не только игры, но и техники владения персонажем.

Гайд по Блад ДК ДД 3.3.5 ПвЕ

Несмотря на то, что в WoW Рыцарь Смерти как персонаж появился относительно недавно, популярности у него уже выше крыши. Вы спросите почему? Да потому что ДК имеет хорошую защиту и множество первоклассных фишек для нанесения урона. В ПвЕ особо важным является момент нанесения максимального урона. Чем больше рейдовый дамаг, тем быстрее выносится противник, поэтому сегодня Блад ДК мы будет рассматривать в этом гайде в качестве ДД. Мы расскажем вам как в Блад ветке можно наносить стабильный максимальный урон, причем достаточно высокий и конкурентно способный. Итак, Гайд по ДД Блад ДК 3.3.5 ПвЕ – погнали! Гайд по Анхоли ДК 3.3.5 ПвЕ …

Итог: Насколько вам понравился данный Гайд?

Рейтинг пользователей 4.15 ( 35 голосов) 0

Гайд по Блад ДК (Танк) в WoW BFA 8.3 / Битва за Азерот

Автор admin На чтение 2 мин Просмотров 327 Обновлено 08.10.2021

Блад ДК (Рыцарь смерти «Кровь») имеет привлекательный стиль игры, основанный на самоисцелении и уменьшении входящего урона. Блад имеет весь необходимый функционал способностей для того, чтобы справиться с абсолютно любым контентом в качестве танка в реалиях Битвы за Азерот.

В данном гайде по Танку Блад ДК в WoW 8.3 BFA рассмотрим основные механики игры.

Билд

Это стандартный билд, подходящий ко всем игровым событиям. Довольно просто в освоении

Ротация

Блад ДК чередует способности защиты и атаки в своей ротации. Ниже приведен стандартный список приоритетов способностей:

Дробление хребта если ваш Костяной щит спадает или вовсе отсутствует.
Удар смерти если у вас осталось мало ХП, или же если ваша следующая атака вызовет оверкап силы рун.
Вскипание крови если у вас есть 2 заряда, или если цели в радиусе не имеют стаков Кровавая чума.
Дробление хребта если у вас 7 или меньше стаков Костяной щит.
Удар в сердце если у вас 3+ руны.
Смерть и разложение если доступен прок от Алая Плеть.
Вскипание крови.

Эссенции

Почти во всех ситуациях вам нужно использовать следующие эссенции:

В общих чертах, старайтесь использовать Сосредоточенный огонь по КД, остальное пассивно.

Приоритет характеристик

В первую очередь, старайтесь экипировать вещи с максимально возможным уровнем. Затем, можно приступить к балансу вторичных статов.

Уровень прдемета > Верса>= Скорость> Крит >= Искусность

Зачаровывание

Порча

Из-за довольно скудного набора аффиксов, вы, скорее всего, будете стремиться к следующим:

На этом гайд по Блад ДК танку в WoW BFA 8.3 завершен.

Блад ДК (Танк) 3.3.5 ПВЕ Гайд

Рыцарь смерти в ветке кровь — это отличный танк, который не только хорошо держит агро, но и может выдавать неплохой ДПС.

Среди игроков World Of Warcraft ходит много мнений, в какой же ветке лучше танковать ДК, Много игроков, особенно среди тех, кто не играл дк считают что лучшая ветка для ДК в роли танка является Лед, некоторые говорят Нечестивость и все они от части правы — в каждой из трех веток рыцаря смерти есть таланты подымающие броню, увеличивающие рейтинг уклонения, уменьшают входящий урон и так далее, однако у танка в ветке кровь есть очень большое преимущество — самоотхил, что дает ему отличную выживаемость среди прочих танков.

1. Характеристики

Защита — для для блад ДК является самым главным и набрать его нужно для рейдов 540 ед. Набрав данное количество бос не сможет по вам критануть и сложить вас за пару ударов.
Выносливость вторая по значимости характеристика для дк в роли танка, ее набираем по принципу чем больше тем лучше
Меткость — набираем 8%, так как Блад ДК танчат с двуручкой
Мастерство — чтобы бос не смог уклонятся от наших парировать ударов нужно набрать 26 ед.
Броня, Уклонение и Парирование — набираем со шмота

Важно! Для Рыцаря смерти приоритет статов у танка в ветке Блад при выборе экипировки выглядят следующим образом:
Защита (до капа 540) > Выносливость > Броня > Уклонение+Парирование > Меткость (до капа 8%) > Мастерство (до капа 26)

2. Способности

Заклинания для набора агро

Ледяное прикосновение – лупит магией, генерирует отличное агро, накладывает озноб, который выделяет дополнительное агро.
Рунический удар – последующий удар в ближнем бою принесет дополнительный урон и сгенерирует хорошее агро. Используем всегда по КД и по силе рун.
Смерть и разложение – выделение большого количества агго и лупит по многим целям. Совместно с символом увеличивает ваше агро на 20%.
Темная власть – это таунт, который будет постоянно заставлять противника вас атаковать. Начинать пулл с нее не рекомендую. Используется только при срыве агро.
Хватка смерти – этот таунт предназначен исключительно для мобов. Притягивает одного из них к вам и заставляет 3 секунды вас атаковать.

Дополнительные заклинания для атаки

Удар чумы – это слабый удар, который способен наложить на противника кровавую чуму.
Мор – не наносит дамага, но способен распространить болезнь на все окружающие вас цели.
Вскипание крови – мочит все цели в округе. Если на цель наложен болезнь, то дамаг увеличивается.
Удушение – в инсте заставит замолчать моба и направит в мили радиус.

Спасательные заклинания для лучшей выживаемости:

Удар смерти – наносит хороший урон. От этого удара Блад ДК отхилится примерно на 9% от общего ХП, при этом выделяя немного агро.
Антимагический панцирь – щит который поглощает магию. Полезная штучка в ЦЛК и в Склепе.
Захват рун – с вкачеными талантами и вставленным символом отхиливает танка н 40% от общего показателя ХП.
Кровь вампира – если стоит символ, то на 15 секунд поднимает ХП на 15 процентов от общего показателя. Можно использовать по КД и в критические моменты.
Войско мертвых – во время его призывов входящий дамаг снизится на 50 процентов. Не выделяет аггро, но помогает вынести противника.
Воскрешение мертвых и смертельный союз – в бою воскрешаем своего вурдалака и жертвуем им сразу в пользу шестидесяти процентам к увеличению общего ХП.

3. Ротация

В основном вся ротация состоит из двух частей: как начать бой и ротация для следующего цикла, которую постоянно необходимо повторять. Основная сложность состоит в постоянном контроле КД на ограниченное число всех рун. Тип самой ротации выбирать необходимо в зависимости от противника. Если на Саурфе необходимо брать больший уклон на агро, то в бою с Ребрадом лучше применить на большую выживаемость, но, к примеру, на профессоре необходимо все четко комбинировать – в 1й и второй фазе держим агро, в третьей фазе переключаем внимание на выживаемость. Все спасательные заклинания применяйте с умом, к примеру, на Ребраде бывает момент, когда первый хил в шипе, второй отхиливает первого и вас получается хилить некому. Не ждите пока здоровье опуститься ниже плинтуса. Если хил находится в шипе – прожимаем кровь вампира и по ситуации захват рун. В остальном, когда видно, что сейчас рейд ляжет, начинайте прожимать спасательные абилки постепенно – это поможет хилам восстановить рейд не отвлекая внимание свое на танка.

Помните, что если висит КД на руны крови, то вешаем баф на 10 секунд, который снизит урон на 10 процентов. Поэтому следите за этим тоже грамотно, а если прошляпили момент, то кровоотвод вас выручит. Не забывайте перед самым пулом проверить – какая у вас стоит власть, иначе вайп.

Ротация для лучшего агро

Та ротация предназначена для одного моба или босса. Если бьем одного моба, то третий и четвертый пункт пула заменяем на вскипание крови. При использовании этого типа ротации вам будет очень необходим символ ледяного прикосновения. Если босса валят бешеные ДД, то постоянно юзаем кровоотвод по КД.

Ротация на выживаемость

Ротация для удержания агро в пачке

Ротация на выживаемость в пачке для ДК танка

В этой ротации есть шанс, что злые ДД сорвут аггро, но маловероятно, что ДК танк превратиться в Мертвого рыцаря. ВНИМАНИЕ! – В ЦЛК данный тип ротации не нужен.

4. Таланты

Поговорим подробно о каждом таланте

Ветка Крови:

«Клинковая ограда» — снижает входящий урон на 5%.
«Клинковая броня» — подымает вашу силу за счет брони.
«Запах крови» — предоставляет нам постоянный источник рун.
«Специализация на двуручном оружии» — урон от двуручного оружия будет больше.
«Захват рун» и «Улучшенный захват рун» — полезная хилка.
«Мрачная решимость» — увеличивает рейтинг крита.
«Отражение заклинаний» — с вероятностью процентов 20 можно отразить почти половину летящего урона.
«Кровавые удары» — увеличения урона от способностей «Кровавый удар», «Удар в сердце» и «Вскипание крови».
«Ветеран Третьей Войны» — увеличивает танковские статы.
«Кровавая метка» — когда вас бьют, то одновременно и хилят, как то так.
«Сила поганища» — увеличивает силу атаки участников рейда на 10% и вашу силу на 2%.
«Истерия» — бафф для дд.
«Великая власть крови» — увеличения отхила и выносливости.
«Усиленный удар смерти» — увеличение урона от способности на 30% и на 50% отхил.
«Кровь вампира» — способность для отхила.

Ветки Лед и Нечестивость:

«Крепость» — увеличение брони и снижение время действия замедлений.
«Болезнетворность» — увеличивает шанс попадания и увеличение агро.
«Предчувствие» — добавляет 5% к уклонам.
«Болезненность» — плюс к агро.
«Ненасытный мертвец» — увеличение силы и + к агро.
«Ночь мертвецов» — уменьшает кд на толпу мертвецов. Это спасательный круг, ибо мертвецы перебирают почти половину урона на себя.

5. Символы

Большие:

Символ болезни – При использовании способности «Мор» время действия болезней и их вторичных эффектов на цели обновляется
Символ захвата рун – Захват рун восстанавливает вам на 10% здоровья больше и излечивает участников вашей группы на 10% от общего запаса их здоровья
Символ крови вампира – Продлевает действие заклинания Кровь вампира на 5 сек

Малые:

6. Чары

7. Камни

8. Bis лист

Аксесуары:

Вот тут поподробнее:

В Цлк: Безупречный клык Синдрагосы, Жизненная сила владыки мира, Неизвестный орган

Для других инстов и рейдов: Один из этих Безупречный клык Синдрагосы, Жизненная сила владыки мира, Неизвестный орган + Монета на удачу

Тут уж какие вам капы нужны, в цлк монета не очень из-за того что дебаф на -20% уклонения, а в других инстах очень не плохо

9. Бонусы от профессий

Горное дело — даст постоянный пассивный баф
Ювелирка – дает возможность вставить 3 великолепных камня на ХП
Энчант – дает уникальную возможность зачарить личные кольца

10. Еда и Химия

Химия:

Зелье несокрушимости — в основном используют это зелье на серьезных боссах. Оно прибавит вам на две минуты + 3500 единиц брони.
Настой каменной крови — увеличит на час ваше ХП на 1300 единиц. Тут, я думаю, останемся без комментарий.

Еда:

Луциан особого приготовления — кушем в том случае, если у вас рейтинг мастерства больше 40 – 50, а меткости не хватает
Люторожий змеестейк — кушаем во всех оставшихся случаях.
Остальная еда для Танка ДК в основном вся одинаковая. Просто прибавляет + 40 единиц к выносливости

11. Макросы

Макрос на Рунический удар

#showtooltip Способность
/script UIErrorsFrame:Hide()
/cast Способность
/cast !Рунический удар
/script UIErrorsFrame:Clear()
/script UIErrorsFrame:Show()

На место Способности впишите способность, которую используете. Сделайте такой макрос для каждой абилки. Данный макрос лучше использовать для ударов в мили, я использую для Удара чумы и для Удара в сердце.

Макрос на болезни

#Showtooltip
/castsequence reset=combat/target/6 Ледяное прикосновение, Удар чумы, Мор
/startattack [harm]

Гайд по Рыцар смерти блад дд в пве 3.3.5

Рыцарь смерти (Дк) в ветке «кровь»(блад) пве,считается не простым персом, ведь нужно знать много нюансов и нажимать много кнопок. Но играя им конечно намного интереснее, при этом он мало чем отличается от воина (вара), так же может как наносить отличный Дпс, и подхватывать роль танков в критические моменты,ведь своя подхилка и броня это позволяет,хоть и на несколько секунд =) но все же.

Выбор расы для Блад Дк дд 3.3.5 ПвЕ

Орда

Орки — отличный выбор для игры за Дк в ветке «кровь» ведь в орков расовые бонусы очень хороши для максимального Дпса, а это Берсерк который дает + 322 к силе атаки. Владения топорами тоже хороший плюс, ну и повышенный урон прислужниками, которые у блад дк в пве как раз то и есть.

Троли — тоже отлично подходят в роли дк в ветке дд блад , ведь расовая на скорость атаки очень помогает для поднятия дпс.

Все остальные расы мало подходят для блад дк в ветке кровь пве 3.3.5 как дд.

Альянс

Дреней — Хорошо подойдет под игру за дд дк в ветке блад пве, единственный плюс в расовой способности это меткость для всего рейда аж на 1 процент, ну как бы не как ну хоть что то.

Другие расы больше подходят как на танков так для пвп спеков.

Характеристики и их капы для Дк в ветке кровь 3.3.5 ПвЕ

Меткость — конечно что б не промазывать по мобам,боссам,и другим, нид иметь для рыцаря смерти в бладе как дд, кап меткости 8 процыков.

Мастерство — добиваемся 6.5 процентов.

Сила — хорошо иметь как минимум 90 процентов, конечно чем больше силы для дк в ветке кровь, тем больше будет и дпс.Но не забываем и про другие капы которых нужно достичь.

Рейтинг пробивания брони (рпб) — так же нужно 90 процыков для того чтоб боссы вас боялись=).

Все остальное наберется само по себе, шмотками.

Билд и символы для Блад Рыцаря Смерти дд 3.3.5 ПвЕ

Отличный билд с которым ваш урон (дамаг) дпс будет на пике.

Ну и конечно же символы для Блад дк пве 3.3.5

Малые символы ставим такие

а остальные на свое усмотрения, толку от них мало.

Ротация для Блад Дк как дд 3.3.5 ПвЕ

Для того что б наносить отличный дамаг дд дк в пве,нужно прожымать спелы в таком порядке.

и так прожымаем все по кругу пока враг не падет.

Бис шмот для ДК дд блад 3.3.5 ПвЕ

Голова

— «Освященный полный шлем повелителя Плети» — сбор т10

Шея

— «Подвеска полутени» для орды орк. — Халион Рубиновое Святилище (РС)

— «Истязающая цепь Ланатель» — ЦЛК Ланатель

Плечи

-«Освященные латные наплечники повелителя Плети» — сбор т10

Спина

-«Ярость Гарроша» — ИВК из сундука

Грудь

-«Освященный боевой доспех повелителя Плети» — сбор т10

Наручи

-«Громадные нарукавники Тоскка» — ЦЛК ларь Смертоносного

Руки

-«Освященные рукавицы повелителя Плети» — сбор т10

Пояс

-«Узы хладного духа» — ЦЛК ларь Сноходицы

Штаны

-«Освященные ножные латы повелителя Плети» — сбор т10

Тапки

-«Приближения Апокалипсиса» — Халион РС

Кольца

— «Пепельное кольцо безграничной мощи» репа в ЦЛК

—«Сила Гнили» — ЦЛК Тухлопуз

Трини

-» Воля Смертоносного» — ЦЛК Орк

— «Заостренная Чешуя» — РС Халион

Пухи

-«Ваятель гробниц» — ЦЛК Принцы

-«Боевая палица Менетила» — ЦЛК Король Лич

-«Темная Скорбь — собираем по квесту.

Сокеты для Дк блад дд 3.3.5 ПвЕ

Мета сокет — «Алмаз жестокого землеправителя»

Красные камни — «Рельефный багровый рубин» + 20 к силе или «Растрескавшейся багровый рубин» + 20 к рейтингу пробивания брони.(рпб) Здесь все зависит от того набрали ли вы кап на рпб, если да то ставим все красные на силу.

Желтые камни — если есть кап на меткость 8%, тогда добиваем капы на рпб и силу красными камнями не смотря на бонус от цвета.

Синие камни -«Слеза кошмаров»+ 10 ко всем характеристикам. А дальше опять таки смотрим что нам не хватает по капах на рпб и силу.

Зачарки для Дк в ветке Кровь дд 3.3.5 ПвЕ

Химия и Еда для Дк Крови дд 3.3.5 ПвЕ

Дк блад дд в пве хоть и нежить но кушать тоже хочет=)

«Настой бесконечной ярости» к силе атаки 180 ед. на 1 час.

«Зелье быстроты» к рейтингу скорости на 500 на 15 сек;

«Сочное мясо люторога« пробивания брони повышается + 40, и выносливость + 40 на 1 час;

«Филе дракоперой рыбы-ангела» сила повышается + 40, и выносливость + 40 на 1час.

Профессии для Дк в ветке Кровь дд 3.3.5 ПвЕ

Хорошо подойдет кузнечка и ювелирка.

Другие спеки Дк, которые могут вас заинтересовать.

Гайд по Фрост Дк танк 3.3.5 ПвЕ

Гайд по Рыцар смерти блад танк в пве 3.3.5

Гайд по Анхоли ДК 3.3.5 ПвП

Гайд по Анхоли ДК 3.3.5 ПВЕ

Гайд для Рыцаря смерти 3.3.5 ПвЕ. ДК танк — Все о World of Warcraft

Доброе утро все почитателям персонажа Рыцарь смерти. Этот гайд уникален, так как основан только на личном опыте многолетних проб и ошибок. Несомненно, друзья, в этой статье вы сможете почерпнуть много интересной информации о том, как играть Рыцарем смерти прокачанным именно для танкования. И так начнем!!!

Выбор ветки: лед, кровь, или нечестивость

В игре бытует очень много мнений о том, какая ветка наиболее лучше подходит для танкования. Многие, кто вообще за ДК не играл, или только начали, утверждают, что кровь – это ветка для ДД, а для танка наиболее подходит ветка – лед. Но друзья, нужно в раскладке талантов смотреть не только на картинки, но и читать, что улучшает тот или иной талант. В каждой из трех веток есть таланты, которые уменьшают входящий урон, поднимают броню, увеличивают рейтинг уклонения и так далее. Вопрос состоит в том, какая же ветка лучше подходит именно вам. Имея многолетний опыт игры ДК танком, я хочу сказать, что самая лучшая ветка для танкования – это кровь. В этой ветке вы сможете отлично держать аггро, и эта ветвь даст наиболее прокачанный и улучшенный ДПС.

Многие игроки склоняются к такой ветке как лед, потому, что она дает 3 власти: власть льда – играет защитную функцию, так как поднимает броню, снижает входящий дамаг, поднимает стамину и аггро. Так вам совсем никто не мешает танковать в крови, и при этом врубить лед.

Скажу вам так: Близарды хотели из ДК сделать культового игрового персонажа с интересными ветками и ротациями. В личе Рыцарь смерти – это единственный класс, который мог свободно танчить во всех ветках, но в итоге большинство нубо-мнений сошлось к ветке лед, как наиболее совершенной для танка. Честно сказать – ведь я и сам такого мнения придерживался, когда начинал геймить за ДК танка. Эта тенденция привела к тому, что в Катаклизме, Близарды из всех веток выдернули таланты для танка и поместили их в ветку кровь, что сделало рыцаря смерти двухкнопочным персонажем. Но этот гайд предназначен для версии 3.3.5, поэтому особо не расстраивайтесь!

Скажу на прямую, пользуйтесь всегда такими вещами как Макросы для Рыцаря смерти — они сделаю игру приятнее и лучше. Прото ДК — частые гости в Цитадели Ледяной короны, поэтому несерьезно будет если вы не знаете такие вещи как Стратегия и тактика в ЦЛК. Используйте для рейдов только лучшие рейдовые аддоны, которые вы с легкостью скачаете у нас.

Почему необходимо выбирать ветку кровь

Внимательно просмотрев в трех ветках таланты, я понял, что наиболее лучше подойдет ветка – кровь. Она дает классное преимущество в самоотхиле и в офигенной выживаемости. К примеру, были вчера в ЦЛК 10 гер в 2 танка и в 2 хила. Первых две стадии стадию третью до семи стаков я танковал, в отчете по отхилу я занял в хил-листе среди хилов третье место. Второй танк при семи стаках перехватил босса, но умер очень быстро, учитывая, что по мне постоянно шел урон на протяжении боя. Это я к тому, что выживаемость в ветке кровь – это первоклассная вещь, аггро так же на высочайшем уровне.

Рассмотрим подробнее танковские абилки

Костяной щит – снизится на 20% урон от трех следующих ударов и нет разницы магических или физических. 20% это отличный показатель при том, если вы имеете около 75к хп в ЦЛК.
Несокрушимая броня – поднимает на 25% броню, и на 20 секунд увеличит силу на 10 процентов. В ЦЛК этот баф нам даст намного меньше, чем новички предполагают. К танкованию ЦЛК, предположим, собралось как минимум 35к брони, что снизит физ-урон на 67%. При включении несокрушимой брони получится 43.7к брони, в итоге физ-урон снизится всего на 7 процентов, а не на 25, как все думают. Чем больше брони, тем входящий физ-урон будет уменьшаться. Все расчеты я приведу немного ниже, дабы вам было понятно, что к чему.
Кровь вампира – поднимает ХП на 15 процентов на 10 секунд. Так же поднимает отхил на 35%, если стоит нужный символ, то работать отхил будет не 10 секунд, а 15. И это позволит вам не превратиться из Рыцаря смерти в Смерть рыцаря, так как при 75 к ХП и при включении абилки вы будете иметь уже 86к ХП, при этом паладин хил будет не 25к отхиливать, а все 34, а это очень неплохо, когда в ЦЛК профессор очень зол.
Скажу так – несокрушимая броня отпадает сразу, а из соперников остаются только «Костяной щит» и «Кровь вампира».
Разница состоит не только в продолжительности действия абилки, но и в отхиле. Костяной щит спадет после того как пройдет серия ударов, кровь вампира не будет спадать на протяжении десяти секунд. Обидно, когда например на Гниломорде слизни снимут костяной щит, а с кровью такого не произойдет до тех пор, пока не пройдет 10 секунд. Выбор тут, друзья, предельно ясен.

Статы и капы для ДК танка 3.3.5 ПвЕ

Дефенс – отлично понижает шанс входящего крита, а так же поднимает ваше уклонение и парирование. Вам необходимо собрать в идеале 540 дефа, чтобы снизить у босса крит практически до нулевой отметки. Выше пятисот сорока – не рекомендую собирать, так как в обычном инсте вам хватит с лихвой а вот с сложных подземельях уделите внимание стамине, так как будет не только больше ХП, но и гораздо больше будет самоотхил.

Авойденс – это общая сумма вероятности парирования и уклонения.

Парирование – в идеале соберите 22%, больший показатель вы позже наберете из шмота. У Рыцаря смерти есть особенность, что ваше парирование увеличивается от волевого отражения на 25%. Поэтому кап силы придаст вам дополнительное увеличение парирования.

Уклонение – специально нет необходимости собирать. Стат легко набирается из шмота, а так же вкаченная нечестивость увеличит уклонение на 5%.

Стамина – для вас должна быть основным показателем в ЦЛК. Ведь стамина даст отличный самоотхил, а это упускать нельзя.

Броня – как всем понятно – отлично занижает входящий урон от противника. Броня будет измеряться в единицах, а сниженный урон в процентах – это называют митингейшеном. Если вы имеете броню в 32к, то митингейшен будет равен 67,75%.Посмотреть это можно будет при наведении мышки в окне персонажа на броню. Хард кап составляет 75%, но я не вижу смысла за ним гнаться, ведь митингейшен подвержен диминишингу, из этого следует, что чем боль набираете брони – тем меньше е эффективность.
И здесь я хочу передать привет всем танкам в ветке льда!!!! Потому что разница в броне между 1к и 5к в митингейшене составляет 25%, а если взять показатель 40к и 45к, то разница составит всего 3%, поэтому всем Фрост танкам привет!!!
Капы аггрогенерирующие:

Меткость – я думаю это всем предельно понятно – чем выше – тем чаще попадете по противнику. ДК в ветке Кровь – наносит удары трех видов – магия, спец-абилки и двуручка. При белых атаках двуручкой необходимо 8% меткости для 100 процентного шанса попадания. Фрост танкам повезло гораздо меньше. Спец-абилки – «Удар смерти», «Удар чумы», «Рунический удар» на них расходуются руны и их сила. Для них кап так же будет составлять 8 процентов. На использование всех магических абилок необходим кап 16 процентов. Ребята, как только вы наберете кап Дефенса, собирайте кап меткости 13%, + 3% в нечестивости вам даст прокаченный талант.

Мастерство – занижает у противника парирование и уклонение. Кап мастерства составляет 26 единиц, этого хватит, чтобы сократить до ноля шанс уклонения и наполовину снизит все шансы парирования.

Сила – штуковина для ДК танка весьма полезная. Дает увеличение аггро, увеличенный исходящий урон и немного увеличивает авойденс.
Скорость, ловкость, крит, силу заклинаний ВООБЩЕ НЕ СОБИРАЕМ!

Прокачка талантов для ДК танка 3.3.5 ПвЕ

Рассказывая о талантах, я не буду делать акцент на том, какой ж спек будет наиболее правильным, тут все зависит от того – как вам будет наиболее удобно. Просто я поставлю в пример ту ветку, в которой мне нравится больше всего играть, и подробно вам объясню свой выбор, на примере которого вы сможете создать свой личный билд.

Для танка все таланты разделены мной на три категории:
На первом месте выживаемость.
На втором – аггрогенерация.
На третьем месте стоят свободные очки, которые просто не на что тратить. Хочу обратить внимание, что в первом ряду каждой ветки имеется 10 очков из них на ДД идут 2 – 3 очка и 5 талантов предназначены для выживаемости. Необходимо просто вкинуть по пять очков талантов для танка в каждой ветке.

Тактика и ротация для ДК танка

В основном вся ротация состоит из двух частей: как начать бой и ротация для следующего цикла, которую постоянно необходимо повторять. Основная сложность состоит в постоянном контроле КД на ограниченное число всех рун. Тип самой ротации выбирать необходимо в зависимости от противника. Если на Саурфе необходимо брать больший уклон на аггро, то в бою с Ребрадом лучше применить на большую выживаемость, но, к примеру, на профессоре необходимо все четко комбинировать – в 1й и второй фазе держим аггро, в третьей фазе переключаем внимание на выживаемость. Все спасательные абилки применяйте с умом, к примеру, на Реброде бывает момент, когда первый хил в шипе, второй отхиливает первого и вас получается хилить некому. Не ждите пока здоровье опуститься ниже плинтуса. Если хил находится в шипе – прожимаем кровь вампира и по ситуации захват рун. В остальном, когда видно, что сейчас рейд ляжет, начинайте прожимать спасательные абилки постепенно – это поможет хилам восстановить рейд не отвлекая внимание свое на танка.

ПОМНИТЕ, что если висит КД на руны крови, то вешаем баф на 10 секунд, который снизит урон на 10 процентов. Поэтому следите за этим тоже грамотно, а если прошляпили момент, то кровоотвод вас выручит. Не забывайте перед самым пулом проверить – какая у вас стоит власть, иначе вайп. Используйте рейдовые аддоны, которые во многом помогают выжить в сложнейших ситуациях.

Ротация для лучшего аггро:

Ротация на выживаемость:

Ротация для удержания аггро в пачке:

Здесь назначение всех рун очень строго расписано, и возможности на ошибку просто нет. Начинаем ротацию с Ледяного прикосновения, этим мы возьмем необходимое аггро, чтобы ДД не сорвали его после первого удара. Потом бросаем лужу и сразу удар чумы, затем следует мор с разбросом по пачке болезней. На основную вашу цель бросаем кровоотвод и тратим руну смерти для ледяного прикосновения для суперского аггро. Потом на каждый цикл в ротации используем одну руну крови на мор для обновления болезней, одну руну на вскипание крови, две ледяные руны на ледяное прикосновение, две анхоли руны на удар чумы, который даст на цель основную дополнительное аггро. Необходим символ ледяного прикосновения.

Ротация на выживаемость в пачке для ДК танка:

В этой ротации есть шанс, что злые ДД сорвут аггро, но маловероятно, что ДК танк превратиться в Мертвого рыцаря. ВНИМАНИЕ!!! – В ЦЛК данный тип ротации не нужен.

Если что-то не понятно, смотрите видео ролик с ротацией ДК танка

Способности Рыцаря смерти. ДК танк

Абилки для аггрогенерации:

Ледяное прикосновение – лупит магией, генерирует отличное аггро, накладывает озноб, который выделяет дополнительное аггро.
Рунический удар – последующий удар в ближнем бою принесет дополнительный урон и сгенерирует хорошее аггро. Используем всегда по КД и по силе рун.
Разложение и смерть – выделение большого количества аггро и лупит по многим целям. Совместно с символом увеличивает ваше аггро на 20%.
Темная власть – это таунт, который будет постоянно заставлять противника вас атаковать. Начинать пулл с нее не рекомендую. Используется только при срыве аггро.
Хватка смерти – этот таунт предназначен исключительно для мобов. Притягивает одного из них к вам и заставляет 3 секунды вас атаковать.

Дополнительные для атаки абилки:

Удар чумы – это слабый удар, который способен наложить на противника кровавую чуму.
Мор – не наносит дамага, но способен распространить болезнь на все окружающие вас цели.
Вскипание крови – мочит все цели в округе. Если на цель наложен болезнь, то дамаг увеличивается.
Удушение – в инсте заставит замолчать моба и направит в мили радиус.

Спасательные абилки для лучшей выживаемости:

Удар смерти – наносит хороший урон. От этого удара кровотанк отхилится примерно на 9% от общего ХП, при этом выделяя немного аггро.
Антимагический панцирь – щит который поглощает магию. Полезная штучка в ЦЛК и в Склепе.
Захват рун – с вкаченными талантами и вставленным символом отхиливает танка н 40% от общего показателя ХП.
Кровь вампира – если стоит символ, то на 15 секунд поднимает ХП на 15 процентов от общего показателя. Можно использовать по КД и в критические моменты.
Войско мертвых – во время его призывов входящий дамаг снизится на 50 процентов. Не выделяет аггро, но помогает вынести противника.
Воскрешение мертвых и смертельный союз – в бою воскрешаем своего вурдалака и жертвуем им сразу в пользу шестидесяти процентам к увеличению общего ХП.

Аддоны для Рыцаря смерти

BloodShieldTracker — контроль за состоянием ДК под щитом крови.

CLC DK – аддон помогает с ротацией.

ComeHere – Великолепное звуковое сопровождение всех действий.

MagicRunes – классно меняет вид панельки.

nibRunes – новейшая панелька для рун.

RuneWatch – наибеле удобная панель с рунами.

SargesUI – уникальная сборка аддонов для ДК.

Get Over Here – изюминка среди аддонов для ДК.

Deadly boss mods. ДБМ — предупреждает о действиях всех боссов в инсте.

Omen Threat Meter – счетчик аггро

Символы для Рыцаря смерти 3.3.5 ПвЕ. ДК танк

Символ болезни – распространит болезнь на всех противников вокруг вас, а так же обновляет постоянно действие болезни.
Символ для захвата рун – ставится в основном для улучшения выживаемости – отхиливает более половины всего ХП один раз в минуту и практически половину всего ХП раз в 30 секунд.
Символ крови вампира – на пять секунд увеличивает общее действие крови вампира.
Символ разложения и смерти – урон от лужи поднимается на 20%.
Символ ледяного прикосновения – урон от вашего озноба поднимется на 20 процентов.
Символ тёмной власти – шанс попасть таунтом увеличивается на 8%.

Инвентарь для ДК танка

Первое, что должно быть – это конечно же «Власть льда».
Гравировка – носим с собой руны каменной горгульи – увеличат на 25 деф и на 2% стамину.
Банки – это настойка каменной крови – поднимет ХП на 1300 единиц.
Еда – Филе из дракоперой рыбы – Ангела.
Свитки выносливости + VIII поднимут ХП на 1320 единиц.

Камни, сокеты для ДК танка

В синие гнезда ставим + 30 к ХП
В красные ставим + 10 единиц к силе, можно вставить фиолетовые на +15 к ХП.
Для желтого гнезда подойдут камни на меткость +10, и зеленые + 15 к ХП.

Зачарки для Рыцаря смерти 3.3.5 ПвЕ. ДК танк

Лично я зачарил свой шмот таким образом:

Кепку зачарил + 37 к здоровью и 20 к дефенсу. Репа Серебряный авангард.
Плечи зачарены — + 30 к ХП и 15 к устойчивости
Плащик зачарен на 16 к дефенсу. Купил у энчатеров.
Нагрудник конечно +275 единиц к ХП у энчатеров.
Браслеты зачарены на + 40 единиц к стамине. Покупаем у энчатеров.
Рукавички накручиваем на 2% к аггро и 10 единиц к парированию.
На ремень наносим Извечную поясную пряжку и камень ставим на + 30 к ХП.
Штаны — поднимаем стамину на + 55, и кожаные накладки + 22 к ловкости.
Сапоги зачарим на + 22 единицы к ХП.

Выбор профессии для ДК танка

Профессию выбираем такую, которая даст увеличение вашего здоровья, которое просто жизненно необходимо.

Горное дело — даст постоянный пассивный баф.
Ювелирка – дает возможность вставить 3 великолепных камня на ХП.
Энчант – дает уникальную возможность зачарить личные кольца.

Спасибо вам за внимание!!! И да покоряться вам вершины ЦЛК!!!

Обычно просматривают еще и эти статьи:

Кровь ДК Ротация ДПС

Эпидемия очень помогает крови, аннигиляции или нет, в основном потому, что у крови нет установленной ротации.

Внезапная смерть + DRM вместе полностью сводят на нет все шансы получить набор из 12 рун для максимизации дпс. Я действительно не хочу описывать все сценарии … но часто бывают случаи, когда на моем 3-м сете я уничтожаю (отключаю болезни) IT, PS (заболевания включаются на 18 секунд!) HSx4, но уважая проки Deathcoil и сохраняя рунические сила от удара 100 (то есть использование ее до того, как я набрал 80-90 рунической силы), моя первая кровь или 2 уже обновлены, и поэтому я могу использовать их снова, и болезни иссякнут, прежде чем я смогу уничтожить.

Короче говоря, много раз я не мог использовать 7 рунических способностей за 16,5 секунд (время, оставшееся до морозной лихорадки после того, как моя кровавая чума была применена PS) из-за всех смертельных катушек, которые я выбрасывал.

Кроме того, время вашей внезапной смерти вызывает дальнейшее вращение винтов… например, иногда я получаю тонну после моего первого HS из 4-кратного вращения HS… так что моя первая руна крови появляется до того, как я использую руну смерти для своего 4-й, поэтому, когда я наношу удар в сердце, я использую исходный, затем удар в сердце руной смерти, затем еще раз HS с руной крови, затем уничтожаю, думая, что у меня будет ледяная и нечестивая руна, но у меня будет только один из них вверх, потому что я только что использовал руну смерти.Это приводит к тому, что можно повторно применить только одну болезнь до того, как кровь поднимется = потеря дпс.

Суть в том, что проки внезапной смерти повышают дпс, но иногда портят вашу ротацию. Если вы постоянно знаете о том, что у каждой конкретной руны мороза и нечестивости осталось время перезарядки, вы можете обойти это и решить, следует ли стирать и повторно применять болезни или просто повторно применять болезни и продолжать поражать сердце. Но это требует большего внимания к рунам, которые я мог бы применить к тому, что происходит вокруг меня.С другими моими деревьями это более определенно, поэтому, за исключением парирования / уклонения, у меня может быть установленное вращение. что освобождает больше моего внимания к тому, что происходит вокруг меня.

Random В стороне: я бы очень хотел, чтобы они уничтожили намного больше dmg в дереве крови и убрали drm. Я нахожу странным использовать свой FU, чтобы дать вам больше рун для ваших способностей с 1 руной. Хотя я понимаю, почему некоторым игрокам нравится этот стиль игры… я просто буду придерживаться других спецификаций, потому что чувствую, что у меня больше контроля над поворотами *пожал плечами*

Самовращение клеток в безвихревом поле переменного тока в оптоэлектрокинетическом чипе

PLoS One.2013; 8(1): e51577.

, ¹ , ² , ³ , ^3
, ^* , ^1
, ^2
, ^4
, ^* , ¹ и ⁵

Лонг-Хо Чау

¹ Центр микро- и наносистем Китайского университета Гонконга, Гонконг,

Вэньфэн Лян

² Государственная ключевая лаборатория робототехники, Шэньянский институт автоматизации, Китайская академия наук, Шэньян, Китай,

Флоренс Винг Ки Чунг

³ Школа биомедицинских наук, медицинский факультет Китайского университета Гонконга, Гонконг,

Винг Кеунг Лю

³ Школа биомедицинских наук, медицинский факультет Китайского университета Гонконга, Гонконг,

Вэнь Юнг Ли

¹ Центр микро- и наносистем Китайского университета Гонконга, Гонконг,

⁴ Кафедра механики и биомедицинской инженерии, Городской университет Гонконга, Гонконг,

Ши-Чи Чен

¹ Центр микро- и наносистем Китайского университета Гонконга, Гонконг,

Гво-Бин Ли

⁵ Кафедра энергетического машиностроения, Национальный университет Цинхуа, Синьчжу, Тайвань,

Аристидес Докослис, редактор

¹ Центр микро- и наносистем Китайского университета Гонконга, Гонконг,

³ Школа биомедицинских наук, медицинский факультет Китайского университета Гонконга, Гонконг,

⁴ Кафедра механики и биомедицинской инженерии, Городской университет Гонконга, Гонконг,

⁵ Кафедра энергетического машиностроения, Национальный университет Цинхуа, Синьчжу, Тайвань,

Королевский университет в Кингстоне, Канада,

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Придумал и спроектировал эксперименты: WJL L-HC. Выполняли опыты: L-HC. Анализировали данные: L-HC WL. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: FWKC WKL G-BL S-CC. Написал статью: L-HC.

Поступила в редакцию 26 июля 2012 г .; Принято 2 ноября 2012 г.

Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что автор и источник оригинала указаны надлежащим образом.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Дополнительные материалы

Рисунок S1: Система ОДЭП. Фактическая установка системы ODEP, используемая для манипулирования клетками в наших экспериментах.

(TIF)

GUID: 444AC0D1-01D7-4281-B5FD-88DA1A905EBD

Рисунок S2: Процедура изготовления устройства ОЕК.

(TIF)

GUID: 27154AE4-0426-4B95-B0FA-CF94E9587891

Фильм S1: Индуцированное вращение мелана-а и лимфоцитов вблизи пятна изображения. Видеозапись, показывающая вращение мелан-а-клеток и лимфоцитов вокруг светового пятна размером 30 мкм в ОЭК при приложенном напряжении 20 Вpp и приложенной частоте 40 кГц.

(WMV)

GUID: CD9C5E19-44E4-446A-93F5-801C000B05CB

Фильм S2: Индуцированное вращение лейкоцитов. Видеозапись, показывающая вращение и манипулирование лейкоцитами в ОЭК при приложенном напряжении 20 Вpp и приложенной частоте от 50 кГц до 200 кГц.Клетки на частоте 50 кГц находились под действием отрицательной силы ДЭП, а на частоте 200 кГц были захвачены оптическим изображением положительной силой ДЭП. В клетках наблюдалось вращение как в светлых, так и в темных областях.

(WMV)

GUID: 17EB4B74-A124-4C1C-ACF3-B5D7C6757D68

Abstract

Использование оптического диэлектрофореза (ODEP) для манипулирования микрочастицами и биологическими клетками становится все более популярным благодаря его универсальности. схемы электродов и проточные каналы.ODEP позволяет параллельно и свободно манипулировать мелкими частицами на фотопроводящей поверхности, на которую проецируется свет, что устраняет необходимость в сложных процессах проектирования и изготовления электродов. В этой статье мы демонстрируем, что мышиные клетки, содержащие клетки мелан-а, клетки макрофагов RAW 267.4, периферические лейкоциты и лимфоциты, можно манипулировать в оптоэлектрокинетическом (ОЭК) устройстве с соответствующими параметрами DEP. Наше устройство OEK создает невращающееся электрическое поле и воздействует на оптические электроды локализованной силой DEP.До сих пор мы были первой группой, сообщившей, что среди всех исследованных клеток было обнаружено, что мелан-а-клетки, лимфоциты и лейкоциты подвергаются самовращению в устройстве в присутствии силы ДЭП. Скорость вращения клеток зависела от приложенного напряжения и частоты, а также от расстояния клеток от оптического центра. Мы обсуждаем возможный механизм объяснения этого нового наблюдения индуцированного самовращения на основе физических свойств клеток. Мы считаем, что это явление вращения может быть использовано для идентификации типа клеток и для выяснения диэлектрических и физических свойств клеток.

Введение

Манипуляции с отдельными клетками играют важную роль в биомедицинских исследованиях в области культивирования, разработки лекарств, физиологии и репликации. Существующие методы манипулирования одной биологической клеткой применяются в микрофлюидных устройствах. Успешное применение механических методов, таких как гидродинамический поток [1]–[2], ламинарный контроль потока [3]–[4] и микромеханические фильтры [5], были успешно продемонстрированы при транспортировке и разделении клеток с учетом размера и морфологии. клеток.Канал, созданный при использовании этих методов, предназначен исключительно для частиц и клеток определенного размера и обеспечивает им желаемый путь движения. Однако устройство может работать неправильно, если в систему для транспортировки или разделения вводятся более крупные или более мелкие частицы. Во многих таких случаях инженерам приходится заново проектировать канал и заново изготавливать устройство. Электрокинетические методы, включая (AC) электроосмос (ЭО) [6], электрофорез (ЭФ) [7], диэлектрофорез (ДЭФ) [8]–[10] и изоэлектрофорез (ИЭФ) [11], могут точно транспортировать объемные клетки в желаемое положение в зависимости от их размера и диэлектрических свойств.Во всех таких методах для направления клеток в заданном направлении требуются чипы с узорчатыми электродами. Эти методы, однако, не могут быть использованы для манипулирования одной клеткой без соответствующим образом спроектированного канала. Они также требуют сложных процессов изготовления, таких как осаждение металла, литография и изготовление каналов. Более того, хотя они и направляют клетки по определенному пути, они не могут манипулировать ими в других положениях.

Недавно была разработана усовершенствованная технология на основе DEP, называемая оптическим диэлектрофорезом (ODEP), для манипулирования клетками и частицами с помощью сфокусированного света и электрического поля переменного тока [12]–[14].В рамках ODEP устройство оптоэлектрокинетики (OEK) используется для выполнения манипуляций с клетками/частицами. Устройство состоит из гладкого фотопроводящего слоя и токопроводящего чипа. Локализованная сила DEP создается на устройстве OEK, когда оптическое изображение, испускаемое источником света, таким как лазер или проектор, проецируется на фотопроводящий слой. Поскольку положение силы DEP зависит от местоположения изображения, оптическое изображение действует как контроллер манипулирования клеткой. Следовательно, клетки могут двигаться в любом направлении в объеме пустоты при достаточной силе ДЭП.

ODEP успешно использовался для манипулирования нано-/микрочастицами/биологическими клетками. В литературе показано, что общее движение частиц в ОЭК-устройстве носит чисто поступательный характер [13]–[15], а генерируемое Е-поле является безвихревым. Однако, согласно YL Liang et al. (2011), дрожжевые клетки одновременно транслируются и вращаются из области темного поля в пятно изображения [16]. В том же исследовании также продемонстрировано, что клетки Рамоса генерируют собственное вращение в устройстве OEK с помощью лунки.Оба наблюдения вращения проводились во вращающемся E-поле. В этой статье мы представляем наши недавние результаты по вращению клеток среди некоторых клеток, исследованных в ирротационном E-поле с использованием устройства OEK. Было замечено, что лейкоциты (WBC) и клетки мелана-α подвергаются самовращению вблизи пятна изображения при соответствующей приложенной частоте и напряжении. Ни физические барьеры, ни другие механические барьеры, такие как колодец, не применялись для содействия вращению клеток.

Теория

Система ODEP состоит из компонентов оптики и DEP.Оптика, то есть проецируемый свет или изображения, контролируют положение силы DEP в устройстве OEK. Когда нет оптического изображения (света), на устройстве не генерируется переменное электронное поле. Когда свет проецируется на конкретную область фотопроводящего слоя, локализованное поле DEP генерируется поперек освещенной области и проводящего слоя. Среднее время действия силы ДЭП на круглую ячейку в устройстве ОЭК выражается уравнением (1) в предположении, что взвешенная в среде клетка имеет идеальную сферическую форму [17]:

(1)

где – диэлектрическая проницаемость среды, R – радиус частицы, – коэффициент Клаузиуса-Моссотти (КМ), – угловая частота, приложенная к среде, E – электрическое поле.Животная клетка состоит из ядра, цитоплазмы и других органоидов и окружена мембраной. Ее можно рассматривать как модель с одной оболочкой, а не с однородной сферой, как показано на рис. Таким образом, коэффициент CM выражается как [18]:

(2)

где , , и . колеблется от -0,5 до 1, и его знак определяет направление силы ДЭП. Если , положительная сила DEP генерируется таким образом, что частицы/клетки стремятся двигаться к области сильного электрического поля. Если , то генерируется отрицательный ДЭП, и таким образом частицы толкаются в область слабого электрического поля.

Несколько исследований в литературе продемонстрировали, что определенные клетки могут вращаться в двухфазном ДЭП E-поле и в ДЭП бегущей волны из-за электровращения. Действительная часть уравнения (2) определяет направление силы ДЭП, а мнимая часть определяет электровращение частиц во вращающемся Е-поле. Теория ДЭП утверждает, что воздействие внешнего электрического поля на поляризуемую частицу приводит к образованию индуцированного дипольного момента.Когда диполь находится в однородном E-поле, каждый заряд на диполе параллелен полю; следовательно, он испытывает крутящий момент. Если направление вектора поля изменяется, вектор индуцированного дипольного момента должен перестроиться с вектором электрического поля, что вызывает вращение частицы. Крутящий момент частицы во вращающемся Е-поле [17] выражается как

(3)

Электровращение происходит, если Е-поле имеет пространственно зависимую фазу, в противном случае . Диэлектрофорез и электровращение являются инструментами, обычно применяемыми для измерения диэлектрических свойств биологических клеток [19].Полученные данные можно использовать для идентификации различных типов клеток или для формирования библиотеки клеток. Ученые и инженеры часто используют эти электрические параметры для управления клетками, например, при разделении и транспортировке клеток с использованием DEP или ODEP.

В этом исследовании наша исследовательская группа наблюдала самоиндуцированное вращение мелана-а, лимфоцитов и лейкоцитов в системе ODEP. Клетки могли вращаться при стационарном и поступательном движении в неоднородном E-поле. Примечательно, что электрическое поле переменного тока, генерируемое в устройстве OEK, не вращалось, вызывая электровращение; следовательно, в соответствии с уравнением (3) крутящий момент не создавался.

Материалы и методы

Инструменты

Система ODEP, использованная в этом исследовании, показана на Рисунке S1 и . Чип OEK был помещен на 2D-стол, интегрированный с оптическим микроскопом (Nikon ECLIPSE TE2000-U). Свет проецировался от коммерческого проектора (DELL 1510X) и проходил через конденсорную линзу (Leica X/0.15), стекло с оксидом индия-олова (ITO) и жидкую среду, а затем фокусировался на гидрогенизированном аморфном кремнии (a-Si:H). поверхность. Картины изображения света контролировались компьютером.Движение клеток регистрировали с помощью высокоскоростной камеры (PCO 1200S) с 40-кратным объективом. Верхние и нижние стеклянные чипы ITO были подключены к генератору сигналов переменного тока и CRO. В каждом эксперименте в устройство ОЕК вводили каплю клеточного раствора, и в микрокамере отсутствовал чистый поток жидкости. Частоты, применяемые для манипуляций с клетками, находились в диапазоне от 10 кГц до 3 МГц, а прикладываемые напряжения были от 0 В до 20 В, от пика к пику. Все эксперименты проводились при комнатной температуре.

Иллюстрация системы ODEP.

Экспериментальная установка для манипулирования клетками с помощью оптоэлектрокинетического устройства.

Химический и клеточный препарат

Иммортализованный мышиный меланоцит, пигментные клетки мелана-а (подарок профессора Д.С. Беннета из Медицинской школы госпиталя Св. Георгия в Лондоне, Великобритания) [20] и беспигментные клетки, включая мышиный RAW Клеточная линия макрофагов 264,7 (ATCC TIB-71), периферические лейкоциты мыши и лимфоциты суспендировали в 0,2 М сахарозе в деионизированной воде. Измеренная электропроводность сахарозы была равна 0.37 мСм ^-1 . Эксперименты проводились сразу после приготовления свежих клеток.

Изготовление оптоэлектрокинетического устройства

a) Изготовление фотопроводящего слоя OEK

Изготовление структуры стекло-ITO-a-Si:H, используемой в этом исследовании, было описано Yen-Heng Lin et al. (2010). [14] Тонкая пленка a-Si:H толщиной 0,3 мкм была нанесена на слой ITO. Он был дополнительно обработан путем травления части a-Si:H для электрического соединения. Участок a-Si:H размером 5 мм × 8 мм был сформирован с помощью стандартной фотолитографии и сухого травления с использованием системы плазменного травления Oxford Plasma Lab 80 с 2% кислорода, 12.5% газа CF ₄, травильная камера 30 мТорр и 6-минутное воздействие плазмы. Затем чип промыли и очистили ацетоном и деионизированной водой перед сушкой газообразным азотом.

b) Изготовление устройства OEK

Устройство OEK было собрано путем объединения стекла с покрытием из аморфного кремния a-Si и стекла с покрытием ITO с промежуточным слоем SU-8, как показано на рис. Слой SU-8 (SU-8 2035, MicroChem, Ньютон, Массачусетс, США) служил микрожидкостным каналом для транспортировки клеточной среды и разделения клеток.Стекло ITO было приготовлено путем распыления 600 Å ITO на чистое стекло в течение 10 минут. Затем в стекле ITO было создано несколько сквозных отверстий, которые служили портами канала. Процесс изготовления микрожидкостного канала СУ-8 состоял из нескольких этапов. Сначала несшитый негативный фоторезист SU-8 наносили на стекло a-Si при 500 об/мин в течение 10 секунд, 1000 об/мин в течение 60 минут и 5000 об/мин в течение 3 секунд для получения толщины 50 мкм, после чего Двухэтапный процесс мягкого выпекания на плите при 65°С в течение 3 минут, затем при 95°С в течение 6 минут.Мягко запеченный SU-8 подвергался воздействию УФ-излучения с помощью устройства для выравнивания маски Karl Suss MA4 в течение 70 секунд. Затем открытый слой SU-8 подвергали твердому обжигу в два этапа: сначала его обжигали при 65°C в течение 1 минуты, затем при 95°C в течение 5 минут. Полученный слой SU-8 охлаждали до комнатной температуры и выдерживали в течение 4 часов перед тем, как подвергнуть процессу проявления для усиления адгезии слоев SU-8 и a-Si. На заключительном этапе проявляли сшитый SU-8, промывали изопропанолом (IPA) и сушили газообразным азотом.

Прибор оптико-электрокинетический (ОЭК).

Иллюстрация OEK, используемого для манипулирования биологическими клетками. Узорчатое оптическое изображение фокусируется конденсорной линзой и проецируется на поверхность гидрогенизированного аморфного кремния.

Подготовленную таким образом структуру a-Si стекло/SU-8 прикрепили к стеклу ITO с использованием метода импринтинга SU-8, показанного на рисунке S2. Сначала на очищенный транспарант наносили центрифугированием слой SU-8 2010 толщиной 10 мкм при 500 об/мин в течение 10 секунд и 3000 об/мин в течение 30 секунд.Затем узорчатая структура SU-8 была отпечатана на несшитом транспаранте с покрытием SU-8, чтобы обеспечить хороший контакт выпуклой поверхности с SU-8. Затем транспарант был отсоединен от конструкции СУ-8. Затем структурированное стекло SU-8/a-Si и стекло ITO выравнивали и приводили в контакт. Затем их плотно зажимали и выпекали в духовке при 150°C в течение 30 минут.

Результаты и обсуждение

Исследование свойств клеток и поведения трансляции в соответствии с ODEP

a) Лейкоциты

Периферические лейкоциты (лейкоциты), собранные у самцов взрослых мышей C57, состоят из различных типов клеток, включая лимфоциты, макрофаги и полиморфноядерные клетки, которые можно разделить на два основных типа: гранулоциты и агранулоциты.Гранулоциты представляют собой лейкоциты, содержащие в своей цитоплазме гранулы; к этой группе относятся нейтрофилы, базофилы и эозинофилы. Агранулоциты — это лейкоциты, не содержащие гранул, такие как моноциты и лимфоциты. Здесь мы обсуждаем поведение вращения и трансляции трех видов клеток в системе ODEP: лейкоцитов, лимфоцитов и макрофагов.

Три первичных образца крови мышей были взяты из брюшной аорты в физиологическом растворе с гепарином или без него и из селезенки мышей C57.Лейкоциты получали после лизиса эритроцитов в растворе хлорида аммония. Лейкоциты в физиологическом растворе без гепарина (WBC), с гепарином (h-WBC) и в селезенке (s-WBC) анализировали на приборе OEK. К чипу OEK применялись частоты в диапазоне от 5 кГц до 300 кГц при 20 Вpp, и результаты показаны в фильме S2 и обобщены в . Все образцы испытывали отрицательную силу ДЭП при частоте менее 50 кГц. Клетки удалялись от виртуального изображения, когда применялась отрицательная сила DEP, как показано на рис.Когда частота была увеличена до 100 кГц, 50 % лейкоцитов, 50 % h-лейкоцитов и 30 % s-лейкоцитов испытывали положительную силу ДЭП. Таким образом, они притягивались из области темного поля в область светлого поля (виртуальное изображение). По мере того как клетки перемещались из области темного поля к пятну изображения, они также генерировали вращательное движение. Ось вращения была перпендикулярна E-полю, а клетки вращались по направлению к изображению. Когда приложенная частота достигала 200 кГц, большинство лейкоцитов и h-лейкоцитов вторгались в пятно изображения посредством положительной силы DEP.Однако только половина s-WBC испытывала положительную силу ДЭП на частоте 200 кГц и выше, что указывало на то, что половина s-WBC не имела положительного частотного спектра ДЭП в исследуемой среде.

Сила DEP, действующая на периферические лейкоциты.

Три оптических изображения были спроецированы на поверхность a-Si:H. Микрополистирольный шарик диаметром 10 мкм служил контролем. (A) Периферийные лейкоциты испытывали отрицательную силу DEP при приложенной частоте 50 кГц и напряжении 10 Вpp. Они лежат в области темного поля и между изображением квадрата и кольца.(B) Когда частота составляла 200 кГц, 10 Vpp, положительная сила DEP вызывала сдвиг клеток в изображение. Шарики полистирола оставались в одном и том же положении в обоих случаях, потому что они испытали отрицательную силу ДЭП только в 0,2 М растворе сахарозы.

Таблица 1

Реакция образцов лейкоцитов в поле DEP.

Сила ДЭП

Применяемая частота (Гц) при 20 Вpp		<50 кГц	100 кГц	200 кГц <
WBCS	отрицательный (100%)	отрицательный (50%) & положительный (50%)	положительный (90%)
	H-WBCS	отрицательный (100%)	50%) и положительный (50%)	положительный (90%)
	s-лейкоциты	отрицательный (100%)	отрицательный (70%) и положительный (30%)	отрицательный %) и положительные (50%)

b) Макрофаги

Макрофаги мыши из RAW 264.7 клеточной линии были ранее исследованы нашей группой [21]. Их диаметр составляет примерно 10 мкм, и ими можно манипулировать только с помощью отрицательной силы DEP в диапазоне частот от 50 до 150 кГц. При подаче на устройство OEK 10 Vpp и 150 кГц макрофаг покидал изображение со скоростью 2 мкм/с. Мы обнаружили, что макрофаги не вращались самостоятельно ни при какой приложенной частоте или напряжении.

в) Лимфоциты

Лимфоциты имеют крупное ядро, которое обычно занимает 80% всей клетки [22].Они имеют сферическую форму и размер от 6 мкм до 7 мкм. Мы тестировали частоты в диапазоне от 25 кГц до 3 МГц. Лимфоциты испытывали отрицательную силу ДЭП ниже 40 кГц, заставляя их отталкиваться от оптического изображения и вращаться в области темного поля. Когда частота была увеличена до 50-800 кГц, клетки подвергались положительной силе DEP и имели тенденцию двигаться к оптическому изображению. Однако в конце концов они остановились на некотором расстоянии от изображения и в этом положении подверглись самовращению.Например, клетки смещались от 150 мкм в пятне изображения до 65 мкм от пятна изображения, если частота изменялась с 40 кГц до 60 кГц. Мы полагаем, что вокруг границы изображения существовала «сила отталкивания», которая, возможно, генерировалась вращающимися в противоположных направлениях структурами электротермического потока вокруг изображения. Эта «сила отталкивания», по-видимому, сильнее, чем сила притяжения ДЭП, действующая на клетки, когда клетки находятся близко к изображению, что препятствует дальнейшему перемещению клеток в изображение.На частоте 140 кГц клетки испытали наибольшую силу ДЭП; одни клетки перемещались внутрь пятна, тогда как другие оставались на расстоянии 30 мкм от пятна. Для частот выше 800 кГц клетки не перемещались и/или не вращались ни в какую сторону, поскольку на них действовала недостаточная сила ДЭП.

d) Мелан-а

Мелан-а представляет собой иммортализованную линию меланоцитов мыши. Меланоциты представляют собой клетки, продуцирующие меланин, расположенные в нижнем слое (базальном слое) эпидермиса кожи. Меланин обычно встречается в большинстве организмов.Он определяет цвет кожи, волос и радужной оболочки. Клетки мелана-а различаются по размеру от 8 мкм до 10 мкм и, по-видимому, имеют сферическую форму при взвешивании в среде, хотя их мембрана не гладкая. Наша группа ранее исследовала их поступательное движение при ОДЭП [21]. Было обнаружено, что реакции клеток мелана-а очень похожи на реакции лимфоцитов в том смысле, что некоторые клетки мелана-а не смещались в пятно изображения, когда к ним применялась положительная сила DEP, как показано в фильме S1. Эти клетки оставались в определенном положении вокруг пятна изображения и подвергались самовращению; например, при 20 Vpp и 100 кГц они вращались со скоростью 90 об/мин и оставались на расстоянии от 10 мкм до 15 мкм от пятна изображения.суммирует ответы клеток мелан-а и макрофагов в приборе ОЕК.

Таблица 2

Реакция мелан-а-клеток и макрофагов на поле ДЭП.

Прикладная частота (Гц) в 20 ВПЗ		<25 K	25 K-50 K	50 K-100 K	50 K-100 K	100 K-300 K	> 300 K
Сила ДЭП	MELAN-A	Положительный дел	положительный деть	положительный деть	положительный дел	положительный отклик	Без ответа
		Все клетки были сильно привлечены к изображению, а затем взрываются.	80% клеток притянулись к изображению. Другие клетки оставались неподвижными рядом с изображением.	Некоторые клетки притягивались к изображению, а некоторые оставались неподвижными рядом с изображением.	70% клеток двигались к изображению, а затем оставались неподвижными рядом с изображением.	Движение клеток не наблюдалось.
		MacroОфаг	Без ответа	Нет ответа	Без ответа	Слабый отрицательный отрицательный отрицательный деть	Нет ответа

	Не наблюдалось перемещение клеток.	Движение клеток не наблюдалось.	Клетки начали медленно отталкиваться от изображения.	Клетки удалялись от изображения со скоростью 2 мкм/с на частоте 150 кГц.	Движение клеток не наблюдалось.

Исследование поведения клеточного самовращения

Как было описано ранее, было обнаружено, что лимфоциты и клетки мелана-а в области темного поля вращаются вблизи пятна изображения под действием как положительных, так и отрицательных сил ДЭП.Оси вращения для обеих ячеек были перпендикулярны приложенному электрическому полю, а направление вращения было направлено к пятну изображения, как показано на рис. В этом разделе мы анализируем отношение скорости вращения ячейки к приложенному напряжению и частоте.

Иллюстрация ротации ячеек в OEK.

Клетки в области темного поля повернуты в сторону изображения пятна размером 30 мкм. Их оси z были перпендикулярны положительным векторам силы ДЭП. Ось вращения находилась на оси х , перпендикулярной Е-полю.

a) Измерение вращения

Движение клеток регистрировали с помощью камеры CCD с фиксированной частотой кадров 64,5/с. Захваченные изображения обрабатывались путем изменения размера изображения и фокусировки на ячейках, как показано на рис. Затем измененные изображения клеток были импортированы в программное обеспечение для отслеживания вращения, разработанное нашей группой. Алгоритм, используемый для процесса отслеживания, сначала идентифицирует характерные точки каждого импортированного изображения ячейки, а затем вычисляет разницу в длине между изображениями по сравнению с первым импортированным изображением и генерирует индекс подобия сопоставления для ячейки в диапазоне от 0 до 1 (где 1 означает идентичны, а 0 означает отсутствие корреляции).Например, первому импортированному изображению был присвоен индекс 1 в качестве эталона, второму изображению было рассчитано значение 0,9973, поскольку его ориентация отличается от ориентации первого изображения, третьему изображению было рассчитано значение 0,9964 и для полного петли вращения ячейки, ее индекс составил 0,9963 по сравнению с первым изображением. В конечном итоге мы можем определить период вращения, взглянув на индекс сходства между последовательностями и рассчитав длину кадров.

Вращение мелан-а.

Промежуток времени для ячейки мелан-а, совершающей один оборот с приложенной частотой 40 кГц при 6 Вразмах, как записано камерой CCD после обработки шкалы серого. Коэффициенты сходства составили 1 (А), 0,9973 (В), 0,9964 (С), 0,99656 (Г), 0,9951 (Е) и 0,9963 (Е). Изображения были сделаны с интервалом 0,155 секунды. Скорость вращения была зафиксирована как 65 об/мин.

b) Скорость вращения в зависимости от напряжения

показывает скорость вращения клеток мелан-а при приложенном напряжении от 0 В до 20 В на частоте 40 кГц.Регистрировали клетки мелана-а, расположенные на расстоянии 65 мкм от светового пятна. Первоначально клетки находились в состоянии покоя от 0 Vpp до 1 Vpp. Они начали самовращение со скоростью 15 об/мин при 2 Вpp и нелинейно увеличивали скорость вращения по мере роста приложенного напряжения. При 20 Vpp клетки мелана-а вращались со скоростью 400 об/мин. На том же графике лимфоциты начали вращаться при 2 Vpp со скоростью 7,4 об/мин. Скорость вращения была нелинейно пропорциональна приложенному напряжению. При 20 Vpp скорость вращения клеток достигала 363 об/мин.

Скорость вращения мелана-а и лимфоцитов в 0,2 М растворе сахарозы в зависимости от приложенного напряжения от 0 до 20 Впик-пик при 40 кГц.

Эти результаты показывают, что скорость вращения конкретных клеток зависит от приложенного переменного напряжения. Графики показывают квадратичную зависимость между скоростью вращения и приложенным напряжением, при этом начальная скорость равна нулю, когда напряжение не подается. Было обнаружено, что взаимосвязь аналогична той, о которой сообщалось в традиционных установках DEP [19], [23]–[24].

c) Скорость вращения в зависимости от частоты

показывает скорость вращения клеток melan-a в зависимости от приложенной частоты при 20 Vpp. Ячейки вращались на применяемых частотах от 25 кГц до 800 кГц. На частотах ниже 25 кГц клетки мелан-а быстро перемещались в пятно изображения и в конце концов взрывались. Если применяемая частота была слишком высокой, например, более 800 кГц, клетки не двигались к пятну и не отталкивались от него, и они не вращались ни в светлопольной, ни в темнопольной областях.На графике показано, что самая высокая скорость вращения 2000 об/мин была достигнута, когда приложенная частота составляла 120 кГц.

Скорость вращения мелана-а в 0,2 М растворе сахарозы в зависимости от применяемой частоты от 40 кГц до 1 МГц при 20 Вpp.

Лимфоциты также дали результаты, сходные с таковыми для мелан-а-клеток. Частоты выше 1 МГц не заставляли клетки подвергаться трансляции и вращению. Ячейки начинали вращаться с частотой 800 кГц и достигали максимальной скорости 1350 об/мин при 120 кГц.Скорость вращения клеток уменьшалась на частотах от 120 кГц до 40 кГц. Частоты ниже 20 кГц, вызывающие эффект нагрева, приводили к образованию пузырьков на поверхности a-Si:H.

Скорость вращения лимфоцитов в 0,2 М растворе сахарозы в зависимости от приложенной частоты от 40 кГц до 1 МГц при 20 Вpp.

и показать, что скорость вращения также связана с частотой. Оба типа клеток достигали наибольшей скорости вращения на определенной частоте и не реагировали в высокочастотных диапазонах.Примечательно, что скорость вращения клеток в зависимости от приложенной частоты очень похожа на типичный спектр электровращения [8], [25]. Следовательно, считается, что эффект вращения связан с ДЭП, но в безвихревом переменном поле Е.

г) Вращение клеток внутри области светлого поля

Когда клетки мелана-а попадали в пятно изображения, они не вращались, как это было в нашем предыдущем исследовании [21]. Однако мы наблюдали вращение лейкоцитов и лимфоцитов в светлопольной области.показывает ротационный анализ лейкоцитов, h-лейкоцитов и s-лейкоцитов. В отрицательной области DEP все клетки образца находились в области темного поля, при этом 95% лейкоцитов и h-лейкоцитов подвергались вращению, а 80% s-лейкоцитов вращались. Разница в проценте вращающихся клеток указывает на то, что состав лейкоцитов, выделенных из кровеносных сосудов и селезенки мышей, не был одинаковым. При увеличении частоты с 50 кГц до 200 кГц все лейкоциты и h-лейкоциты и 50% s-лейкоцитов перемещались в область светлого поля под влиянием положительной силы ДЭП.Мы заметили, что некоторые клетки в пятне изображения вращались. Однако доля каждого типа клеток в пятне изображения различалась: 90% лейкоцитов, 90% h-лейкоцитов и 30% S-лейкоцитов вращались на световом изображении.

Таблица 3

Вращение образцов лейкоцитов в поле DEP.

Применяемая частота (Гц) при 20 Вpp		<50 кГц		200 кГц<
		Область темного поля	Область светлого поля	Область темного поля	Область светлого поля
Индуцированное вращение	WBCS	95% Rotate	N / A	95% Rotate	90% Rotate	90%	9027	H-WBCS	95% ROTATE	N / A	95% Votate	90 % Rotate
	S-WBCS	80%	80% Rotate	N / A	90% ROTATE	90% ROTATE	30% ROTATE

Лимфоциты (B- / T- и NK-) также вращаются в область светлого поля.Первоначально в пятно изображения были захвачены три лимфоцита, и один из них вращался с постоянной скоростью. Вращающийся лимфоцит изолировали от других клеток и перемещали в бесклеточную зону. Световое пятно с тем же диаметром и приложенной частотой и напряжением проецировалось на вращающуюся ячейку, но оно вообще не вращалось, даже при изменении частоты. Эксперимент был повторен, и были получены аналогичные результаты, указывающие на то, что на вращение клеток в светлопольной области влияли соседние клетки.Хольцапфель и др. (1982) сообщили о сходных результатах, в частности, что две соседние клетки протопласта в поле DEP заставляли друг друга вращаться [24]. Автор утверждал, что клетки могут вращаться только за счет межклеточных взаимодействий или локального возмущения Е-поля. Однако, поскольку межклеточное взаимодействие может привести к локальному возмущению электрического поля, дипольный момент одной клетки взаимодействует с дипольным моментом другой клетки, вызывая вращение.

Несмотря на все вышеизложенное, отдельная клетка может вращаться в одиночку в области темного поля.Физический механизм, управляющий вращением клеток при ODEP, до сих пор неясен. Мы предполагаем, что вращение происходит из-за неравномерного распределения массы внутри клеток, такого как наклон большого ядра в лимфоцитах или неравномерное распределение меланина в клетках мелан-а. Когда в ячейке создается дипольный момент, он выравнивает ячейку параллельно электрическому полю. Если центр тяжести (ЦТ) ячейки не находится в ее геометрическом центре, дипольный момент может заставить ячейку непрерывно вращаться с достаточной силой DEP.Следовательно, физические свойства лимфоцитов и мелан-а-клеток могут вызывать их самовращение.

Эти явные результаты показывают индуцированное вращение клеток под влиянием оптически индуцированного DEP. При дальнейших экспериментах по изучению того, как на характеристики вращения клеток может влиять их объем, морфология, органеллы и электрические свойства, это наблюдаемое явление самовращения потенциально может быть использовано для идентификации и разделения различных типов клеток. Например, мы предвидим, что может быть разработана автоматизированная система для отбора клеток на разных фазах клеточного цикла.В клеточном цикле есть четыре фазы: фаза G ₁ промежутка, фаза синтеза (S), фаза G ₂ промежутка и фаза митоза (M), и они коррелируют с различными диэлектрическими свойствами, такими как изменения относительного электрическая проницаемость [26] и физические свойства, такие как объем и размер [8]. Таким образом, основываясь на наших текущих результатах, вполне возможно отделить клетки от четырех фаз клеточного цикла с помощью ODEP, и процесс разделения можно автоматизировать путем внедрения алгоритмов компьютерного зрения для анализа и дифференциации движения вращения клеток в реальном времени.

Заключение

В этой статье мы описываем кинетику лейкоцитов, лимфоцитов, макрофагов и клеток мелана-а в приборе OEK, подвергаемом воздействию различных напряжений и частот переменного тока.

Э-поле, генерируемое в устройстве ОЭК, было нелинейным и безвихревым. Тем не менее, большинство лейкоцитов и мелан-а-клеток вращались. Мы предполагаем, что самовращение клеток происходит из-за неравномерного распределения их массы, так что, как только на клетке создается дипольный момент, она выравнивается, чтобы двигаться параллельно Е-полю.Однако, поскольку центр масс клетки не расположен точно в ее центре, ячейка будет продолжать вращаться. Это явление аналогично двигателю переменного тока.

Предстоит проделать большую экспериментальную работу, чтобы получить полную теоретическую модель вращения клеток в ODEP. Тем не менее наблюдаемое здесь явление вращения клеток имеет большой потенциал для использования в конструировании биомаркеров для различных клеток. В дополнение к его применению для идентификации клеток, его также можно использовать для характеристики клеток с точки зрения их диэлектрических и механических свойств, учитывая, что наши результаты показывают, что скорость вращения и поступательное движение неразрывно связаны с приложенным напряжением и частотой.

Дополнительная информация

Рисунок S1

Система ОДЭП. Фактическая установка системы ODEP, используемая для манипулирования клетками в наших экспериментах.

(TIF)

Рисунок S2

Процедура изготовления устройства ОЕК.

(TIF)

Фильм S1

Индуцированное вращение мелана-а и лимфоцитов вблизи пятна изображения. Видеозапись, показывающая вращение мелан-а-клеток и лимфоцитов вокруг светового пятна размером 30 мкм в ОЭК при приложенном напряжении 20 Вpp и приложенной частоте 40 кГц.

(WMV)

Фильм S2

Индуцированное вращение лейкоцитов. Видеозапись, показывающая вращение и манипулирование лейкоцитами в ОЭК при приложенном напряжении 20 Вpp и приложенной частоте от 50 кГц до 200 кГц. Клетки на частоте 50 кГц находились под действием отрицательной силы ДЭП, а на частоте 200 кГц были захвачены оптическим изображением положительной силой ДЭП. В клетках наблюдалось вращение как в светлых, так и в темных областях.

(WMV)

Благодарности

Авторы благодарят г-наTak-kit LAU и г-ну Kai-wun LIN из Лаборатории сетевых датчиков и робототехники Китайского университета Гонконга (CUHK) за их помощь с визуальной системой.

Заявление о финансировании

Этот проект финансировался стартовым фондом Городского университета Гонконга (номер проекта 9610216). Проект также частично поддержал ассистент выпускника Китайского университета Гонконга г-на Лонг-Хо Чау. Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Каталожные номера

1. Bang H, Chung C, Kim J, Kim S, Chung S и др. (2006)Микрофабрикат флуоресцентно-активированного клеточного сортировщика с помощью гидродинамического управления потоком. Микросистемные технологии 12: 746–753. [Google Академия]2. Дэвис Дж.А., Инглис Д.В., Мортон К.Дж., Лоуренс Д.А., Хуанг Л.Р. и др. (2006) Детерминированная гидродинамика: разделение крови. ПНАС 103: 14779–14784. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]3. Роман Г., Чен Ю., Виберг П., Калбертсон А., Калбертсон К.Т. (2007) Манипулирование и анализ одиночных клеток с использованием микрожидкостных устройств.Аналитическая и биоаналитическая химия 387: 9–12. [PubMed] [Google Scholar]4. Wu Z, Hjort K, Wicher G, Fex Svenningsen A (2008)Микрофлюидное разделение нервных клеток с высокой жизнеспособностью с использованием вязкоупругого гидродинамического распределения. Биомедицинские микроустройства 10: 631–638. [PubMed] [Google Scholar]5. Wu HW, Lin XZ, Hwang SM, Lee GB (2009)Микрожидкостное устройство для разделения мезенхимальных стволовых клеток амниотической жидкости с использованием структур решетки жалюзи. Биомедицинские микроустройства 11: 1297–1307. [PubMed] [Google Scholar]6.Wu J, Ben Y, Battigelli D, Chang HC (2005) Электроосмотическое улавливание переменного тока на большие расстояния и обнаружение биочастиц. Ind Eng Chem Res 44: 2815–2822. [Google Академия]7. Минерик А.Р., Остафин А.Е., Чанг Х.К. (2002)Электрокинетический транспорт эритроцитов в микрокапиллярах. Электрофорез 23: 2165–2173. [PubMed] [Google Scholar]8. Kim U, Shu CW, Dane KY, Daugherty PS, Wang JYJ и др. (2007)Селекция клеток млекопитающих на основе фазы их клеточного цикла с использованием диэлектрофореза. ПНАС 104: 20708–20712.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Парк К., Сук Х.Дж., Акин Д., Башир Р. (2009) Манипулирование клетками на основе диэлектрофореза с использованием электродов на многоразовой печатной плате. Лаборатория на чипе 9: 2224–2229. [PubMed] [Google Scholar] 10. Краймс А., Хошманеш К., Стоддарт П., Каяни А., Митчелл А. и др. (2012) Активный контроль расстояния между наночастицами серебра с помощью диэлектрофореза для поверхностно-усиленного комбинационного рассеяния». Анальная химия 84: 4029–4035. [PubMed] [Google Scholar] 11. Vahey MD, Voldman J (2009) Высокопроизводительная ячейка и характеристика частиц с использованием изодиэлектрического разделения.Анальная химия 81: 2446–2455. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Chiou PY, Wong W, Liao JC, Wu MC (2004)Адресация и захват клеток с использованием новых оптоэлектронных пинцетов. 17-я Международная конференция IEEE по микроэлектромеханическим системам 21–24. [Google Академия] 13. Лян В., Ван С., Цюй Ю., Донг З., Ли ГБ и др. (2011) Эквивалентная электрическая модель для численного анализа манипулирования ODEP. Международная конференция IEEE по нано/микроинженерным и молекулярным системам (NEMS) 825–830.[Google Академия] 14. Lin YH, Lee GB (2010)Интегрированное устройство для подсчета клеток и непрерывного лизиса клеток с использованием оптически индуцированного электрического поля. Датчики и приводы B: Химические 145: 854–860. [Google Академия] 15. Lin YH, Lin WY, Lee GB (2009) Манипуляции с клетками, управляемые изображениями. Журнал IEEE по нанотехнологиям 3: 6–11. [Google Scholar]

17. Morgan H, Green NG (2002) Электрокинетика переменного тока: коллоиды и наночастицы. 1-е изд. Научные исследования проф.

18. Li M, Qu Y, Dong Z, Wang Y, Li WJ (2008) Ограничения наносборки частиц Au с использованием диэлектрофоретической силы: параметрическое экспериментальное и теоретическое исследование.Транзакции IEEE по нанотехнологиям 477–479. [Google Академия] 19. Gimsa J, Marszalek P, Loewe U, Tsong TY (1991)Диэлектрофорез и электровращение клеток слизи нейроспоры и мышиной миеломы. Биофизический журнал 60: 749–760. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]20. Bennett DC, Cooper PJ, Hart IR (1987)Линия неонкогенных мышиных меланоцитов, сингенных с меланомой B16 и требующих промотора опухоли для роста. Int J Рак 39 (3) 414–418. [PubMed] [Google Scholar] 21. Чау Л.Х., Оуян М., Лян В., Ли Г.Б., Ли В.Дж. и др.(2012) Индуцирование самовращения клеток Melan-a с помощью ODEP. Международная конференция IEEE по нано/микроинженерным и молекулярным системам 195–199. [Google Академия] 22. Лойко В.А., Рубан Г.И., Грицай О.А., Бердник В.В., Гончарова Н.В. (2007) Морфология мононуклеаров для различения клеток по угловой структуре рассеянного света. 10-я конференция по электромагнитному рассеянию и рассеянию света несферическими частицами 105–108. [Google Академия] 23. Оуян М., Чжан Г., Ли В.Дж., Лю В.К. (2011)Самоиндуцированное вращение пигментированных клеток с помощью диэлектрофоретического силового поля.Международная конференция IEEE по робототехнике и биомиметике (ROBIO) 1397–1402 гг. [Google Академия] 24. Хольцапфель С., Винкен Дж., Циммерманн У. (1982) Вращение клеток в переменном электрическом поле: теория и экспериментальное доказательство. Журнал мембранной биологии 67: 13–26. [PubMed] [Google Scholar] 25. Huang Y, Holzel R, Pethig R Wang XB (1992) Различия в электродинамике переменного тока жизнеспособных и нежизнеспособных дрожжевых клеток, определенные с помощью комбинированных исследований диэлектрофореза и электровращения. Физ Мед Биол 37: 1499.[PubMed] [Google Scholar] 26. Асами К., Такахаши К., Сирахиге К. (2000) Прогрессирование клеточного цикла, отслеживаемое с помощью диэлектрической спектроскопии и проточного цитометрического анализа содержания ДНК. Дрожжи 16: 1359–1363. [PubMed] [Google Scholar]

ВЫДЕЛЕНИЕ И ГЕНЕРАЦИЯ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

Справочная информация

Дендритные клетки представляют собой небольшую субпопуляцию лейкоцитов костного мозга, которые развиваются в линии моноцитов (Steinman, 1991; Zhou and Tedder, 1996) . Дендритные клетки классифицируются в первую очередь на основе их расположения в ткани; таким образом, они классифицируются как клетки межпальцевого ретикулума, когда они присутствуют в лимфоидных органах, как вуалированные клетки, когда они присутствуют в афферентной лимфе, как дендритные клетки крови, когда они находятся в кровотоке, как клетки Лангерганса, когда они присутствуют в эпидермисе, и как дермальные дендритные клетки, когда они обнаруживаются в лимфатических узлах. дерма кожи (Штайнман и Кон, 1973; Штейнман, 1991).Из многих из этих тканей были выделены дендритные клетки человека (4). Хотя дендритные клетки широко распространены по всему организму, они обладают многими общими чертами: неправильная форма с обширными и удлиненными дендритными отростками (), отчетливый фенотип клеточной поверхности (включая очень высокие уровни антигенов МНС класса II), низкая плавучая плотность, активность. подвижность и способность стимулировать энергичную пролиферацию непримированных Т-клеток.

Таблица 7.32.2

Процедуры выделения дендритных клеток человека из тканей Т-клеточно-зависимые антитела (Steinman, 1991).Они также являются основными клетками-стимуляторами первичных смешанных лейкоцитарных реакций и активно участвуют в аутоиммунных заболеваниях, отторжении трансплантата и ВИЧ-инфекции. Таким образом, возможность выделения и дальнейшей характеристики дендритных клеток имеет большое значение и практическую пользу.

Выделение достаточного количества чистых дендритных клеток у человека всегда было затруднено из-за их очень низкой частоты в крови (~0,2%) и тканях (Zhou and Tedder, 1995a). были выделены многочисленными лабораториями и изучены с использованием различных методов (Van Voorhis et al., 1982; Найт и др., 1986; Янг и Штейнман, 1988; Фройденталь и Штейнман, 1990; Эгнер и др., 1992; Вуд и Фройденталь, 1992; Сюй и др., 1992; Эгнер и др., 1993а; Томас и др., 1993). Препараты мононуклеарных клеток, обогащенные дендритными клетками, обычно выделяют с помощью отрицательного отбора, потому что дендритные клетки в крови лишены поверхностных антигенов, обнаруженных на Т-клетках, В-клетках, моноцитах и NK-клетках (4). Количество дендритных клеток в клеточных препаратах определяли прежде всего путем определения частоты клеток с дендритной морфологией, частоты клеток с ограниченным фенотипическим профилем или способности клеток стимулировать смешанные лейкоцитарные реакции.Однако недавняя идентификация CD83 как маркера, преимущественно экспрессируемого дендритными клетками человека, значительно облегчила их выделение, идентификацию и характеристику (Zhou et al., 1992; Engel et al., 1995; Weissman et al., 1995; Zhou and Теддер, 1995a,b, 1996).

CD83 преимущественно экспрессируется на поверхности дендритных клеток, включая дендритные клетки крови, клетки Лангерганса кожи и клетки межпальцевого ретикулума, присутствующие в Т-клеточных зонах лимфоидных органов (Zhou et al., 1992; Энгель и др., 1995). Клетки CD83 ⁺, выделенные из крови, представляют собой гомогенную и уникальную популяцию клеток с характерной клеточной морфологией и функциональной активностью зрелых дендритных клеток. Клетки CD83 ⁺ экспрессируют самые высокие уровни молекул MHC класса II по сравнению с другими линиями лейкоцитов и являются наиболее сильными стимулирующими клетками в аллогенных смешанных лейкоцитарных реакциях. Другие циркулирующие лейкоциты не экспрессируют обнаруживаемые уровни CD83 ex vivo, но этот антиген слабо экспрессируется некоторыми лимфоцитами зародышевого центра in vivo (Zhou et al., 1992).

Клетки CD83 человека ⁺ имеют уникальный фенотип, экспрессируя несколько связанных с линией антигенов, таких как маркеры Т-клеток CD2 и CD5, маркеры В-клеток CD40 и CD78 и маркеры миелоидных клеток CD13, CD32 (FcγR II), CD33, CD36 и CD63, а также большое количество антигенов, ассоциированных с лейкоцитами (Zhou, Tedder, 1995a). Следовательно, можно определить зрелые дендритные клетки как клетки CD83 ⁺, а не полагаться главным образом на клетки, имеющие морфологию, подобную дендритной клетке, или обладающие наибольшей активностью в смешанной лейкоцитарной реакции.

Использование MAb CD83 обеспечивает удобный и эффективный способ быстрого отделения дендритных клеток от основной массы мононуклеарных клеток без явных функциональных нарушений. Основной протокол 1 использует MAb CD83 в качестве фенотипического маркера для оценки чистоты дендритных клеток. Альтернативный протокол использует MAb CD83 для положительного отбора дендритных клеток из популяций мононуклеарных клеток с использованием иммуномагнитной селекции. MAb CD83 также можно использовать в процедурах пэннинга для выделения чистых дендритных клеток из популяций клеток, обогащенных дендритами.

Антигены клеточной поверхности CD2 и CD4 на дендритных клетках также полезны. Используя протоколы иммуномагнитной селекции, каждый CD2 и CD4 использовали для выделения популяций дендритных клеток из популяций мононуклеарных клеток, обедненных лимфоцитами, NK-клетками и моноцитами. Однако CD2 экспрессируется только на низких уровнях зрелыми дендритными клетками, в то время как он экспрессируется на высоких уровнях Т-клетками, а CD4 экспрессируется «незрелыми» дендритными клетками крови, но не зрелыми CD83 ⁺ дендритными клетками (Zhou and Tedder, 1995a). , 1996).Недавно была предложена новая номенклатура моноцитов крови и дендритных клеток (Ziegler-Heitbrock, et. al., 2010). Поскольку дендритные клетки являются единственными клетками в крови, которые экспрессируют CD83, MAb CD83 также можно использовать для истощения дендритных клеток из препаратов мононуклеарных клеток с использованием процедур выделения магнитных шариков (Zhou and Tedder, 1995a).

Были идентифицированы три популяции клеток крови, которые имеют или могут развить морфологию дендритных клеток: одна небольшая субпопуляция, которая уже является CD83 ⁺, одна популяция, которая становится CD83 ⁺ после очень коротких периодов культивирования, и одна популяция который происходит из миеломоноцитарных клеток, но не экспрессирует CD83 даже после культивирования или активации (Weissman et al., 1995; Чжоу и Теддер, 1995а). Популяция клеток с дендритной морфологией, которая происходит от миеломоноцитарных клеток, может представлять собой часть клеток-предшественников, которые становятся CD83 ⁺ при культивировании в присутствии GM-CSF, IL-4 и TNF-1 (Zhou and Tedder, 1996). ).

Приведенные выше результаты согласуются с другими наблюдениями, согласно которым многие дендритные клетки крови циркулируют как клетки-предшественники, которые претерпевают фенотипические и морфологические изменения во время их дифференцировки в функциональные антигенпрезентирующие клетки после периода созревания (Knight et al., 1986; Маркович и Энглеман, 1990 г.; О’Доэрти и др., 1993; Романи и др., 1994; Томас и Липски, 1994). Смешанные популяции клеток миелоидного происхождения, которые включают клетки с морфологией, фенотипом и функцией дендритных клеток, также могут быть получены из клеток-предшественников костного мозга или крови человека после культивирования с комбинациями гранулоцитарного/моноцитарного колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) и либо фактор некроза опухоли α (TNF-α) или интерлейкин 4 (IL-4; Caux et al., 1992; Reid et al., 1990, 1992; Santiago-Schwarz et al., 1992, 1993; Романи и др., 1994; Сабольч и др., 1995). Эта стратегия была использована, чтобы показать, что дендритные клетки действительно могут быть получены непосредственно из моноцитов CD14 ⁺ крови человека (Zhou and Tedder, 1996). Следовательно, клетки с дендритной морфологией в крови человека гетерогенны, но, вероятно, представляют собой общую линию клеток на разных стадиях дифференцировки.

Дифференцировку моноцитов крови в достаточно гомогенную популяцию функционально зрелых CD83 ⁺ дендритных клеток под влиянием специфического каскада цитокинов можно разделить на несколько этапов (Zhou, Tedder, 1996).На первом этапе GM-CSF/IL-4 индуцируют клетки CD14 ⁺ CD1a ⁺ с дендритной морфологией. На втором этапе клетки индуцируются TNF-α для дифференцировки в клетки CD83 ⁺ CD14 ^– CD4 ⁺. Наконец, на третьей стадии, включающей продолжение культивирования, происходящие из моноцитов клетки CD83 ⁺ развиваются в клетки со сниженной экспрессией CD1a, которые имеют фенотип дермальных дендритных клеток. Истощение клеток CD14 ⁺ из препаратов мононуклеарных клеток истощает большинство предшественников дендритных клеток (Zhou and Tedder, неопублик.наблюдать.). Это открытие поддерживает и расширяет более ранние результаты, в которых были идентифицированы субпопуляции моноцитов крови или адгезивные клетки с дендритной морфологией, размером, фенотипом клеточной поверхности или функцией (Knight et al., 1986; Kabel et al., 1989; Najar et al. , 1990; Peters et al., 1991; Ruppert et al., 1991; Grage-Griebenow et al., 1993). Способность генерировать дендритные клетки из моноцитов обеспечивает новый и простой метод получения функционально зрелых дендритных клеток из популяции клеток, которые относительно легко изолировать до гомогенности, в отличие от стволовых клеток CD34 ⁺ или других клеток-предшественников.

В альтернативном протоколе 2 мы описываем получение ДК из продукта лейкафереза: этот протокол используется во многих клинических исследованиях на основе ДК для получения большого количества ДК ex vivo (Steinman and Banchereau, 2007; Gilboa, 2007; Уэно и др., 2010). ДК созревают с помощью смеси трех провоспалительных цитокинов (IL-1β, IL-6 и TNF-α) и простагландина E ₂ (Jonuleit et al., 1997; Lee et al., 2002). Поскольку влияние PGE ₂ на выработку IL-12 DC сомнительно (Kalinski et al., 2001; Landi et al., 2011), в некоторых исследованиях указанный выше коктейль используется без PGE ₂ . Многие лаборатории также оценивают другие коктейли для созревания ДК, включая агонисты толл-подобных рецепторов (TLR), лиганд CD40 и их различные комбинации, и создание оптимальных ДК для вакцинации остается активной темой исследований (Macagno et al., 2007; Ueno et al., 2010; Schreibelt et al., 2010; Skalova et al., 2010; Castiello et al., 2011). Крайне важно оценить все стратегии генерации и созревания ДК по фенотипу, функции (презентация антигена Т- и/или В-лимфоцитам), миграции (миграция in vitro к хемокину CCL19 или макрофагальному воспалительному белку 3 бета, MIP-3β) и цитокину. секреция при активации.

Способность генерировать дендритные клетки in vitro из их предшественников имеет большое значение. Учитывая способность дендритных клеток вызывать сильные антиген-специфические хелперные и цитотоксические Т-клеточные ответы, способность изолировать или генерировать большое количество гомогенных препаратов дендритных клеток CD83 ⁺ облегчит манипулирование этой клеточной линией для разработки вакцин, органов. трансплантацию и терапию ex vivo для лечения широкого спектра заболеваний человека. В целях сравнения также полезно генерировать клеточные препараты, лишенные дендритных клеток, как подробно описано в Основном протоколе 3.Способность истощать CD83 ⁺ дендритных клеток может оказаться полезной для предотвращения реакции «трансплантат против хозяина» (Wilson et al., 2009).

Как указано выше, существует несколько способов выделения или получения дендритных клеток человека. Следует соблюдать осторожность при оценке свойств или функции дендритных клеток с использованием препаратов неоднородных клеток, обогащенных дендритными клетками, поскольку может быть получена значительная изменчивость. Поскольку существуют огромные различия в том, как отдельные лаборатории оценивают чистоту и функцию дендритных клеток, в литературе остаются значительные разногласия.Эта гетерогенность еще более усиливается тем фактом, что дендритные клетки могут находиться на разных стадиях «зрелости», что также может влиять на их функцию. Хотя дендритные клетки CD83 ⁺, выделенные каждым из этих методов, являются фенотипически, функционально и морфологически гомогенными в большинстве анализов, остается возможной дополнительная гетерогенность, которая в настоящее время не оценивается.

Критические параметры

Единственным наиболее важным фактором в выделении достаточного количества дендритных клеток из мононуклеарных клеток крови человека является наличие большого количества исходных клеток.Небольшие объемы крови плохо подходят для выделения дендритных клеток, и в этих случаях целесообразно генерировать дендритные клетки из моноцитов (см. Основной протокол 2). Лучше всего подходят свежевыделенные мононуклеарные клетки, но более чем адекватные результаты могут быть получены с однодневными препаратами мононуклеарных клеток, которые хранились на льду. Обогащенные лейкоцитами «лейкопаки», которые были выделены в течение последних 24 часов, можно получить в крупных банках крови или в компании North American Biologicals.Лейкопаки обычно получают тотальным лейкаферезом доноров, поэтому из каждого лейкопака удается выделить 2–12 × 10 ⁸ мононуклеарных клеток. Однако количество мононуклеарных клеток в лейкопаке будет значительно варьироваться в зависимости от источника и донора крови. В качестве альтернативы можно использовать обогащенные лейкоцитами «лейкоцитарные пленки», приготовленные из донорских единиц периферической крови или в результате процедур плазмафереза. Различия в процедурах выделения могут влиять на нейтрофилы в лейкопаках, что затрудняет удаление нейтрофилов из препарата мононуклеарных клеток с помощью центрифугирования в градиенте плотности Ficoll-Paque.В этих случаях чистота конечного препарата дендритных клеток может быть значительно снижена, поскольку нейтрофилы разделяют многие плавучие свойства дендритных клеток. Единицы цельной крови также можно использовать в качестве исходной популяции клеток, но конечный выход дендритных клеток тесно связан с количеством исходных клеток, поэтому для получения приемлемых выходов требуется достаточное количество клеток. Это особенно важно для экспериментов, где дендритные клетки необходимо очистить до гомогенности путем сортировки клеток.Типичные выходы после сортировки клеток составляют ~ 10% исходной популяции меченых клеток, которые сортируются, когда частота клеток CD83 ⁺ составляет> 50%, но сильно различаются в зависимости от уровня чистоты дендритных клеток и скорости сортировки.

Шаги, чувствительные к технике, включают манипуляции с клетками, поскольку они могут привести к большим потерям клеток. Единственным наиболее важным шагом является мытье посуды для культур тканей без неприлипающих дендритных клеток после пластиковой приверженности (см. Основной протокол 1).Необходимо соблюдать осторожность, чтобы очистить всю поверхность от неприлипших клеток, пипетируя с достаточной силой, чтобы сместить неприлипшие клетки, в то же время избегая чрезмерного усилия, которое может привести к отрыву прилипших клеток. На этих этапах важно использовать теплую среду, потому что холодная среда отделяет прилипшие клетки от пластика.

Клетки, полученные с использованием Базового протокола 1, обогащены дендритными клетками. Относительное количество дендритных клеток можно приблизительно оценить с помощью фазово-контрастной микроскопии клеток в гемацитометре.Дендритные клетки большие и имеют неправильные, длинные мембранные отростки (1), тогда как лимфоциты маленькие и круглые. Если требуется более высокая чистота дендритных клеток, можно провести второе центрифугирование в градиенте плотности метризамида для удаления загрязняющих лимфоцитов. Загрязняющие В-лимфоциты и моноциты, которые связываются с EA через свои поверхностные Fc-рецепторы, могут быть дополнительно удалены из препаратов дендритных клеток путем розеткообразования EA, как описано в UNIT 3.7 для дендритных клеток мыши.

В качестве альтернативы моноциты могут быть истощены путем прикрепления к чашкам, покрытым человеческим Ig, а В-лимфоциты могут быть истощены на чашках, покрытых козьим античеловеческим Ig. Истощение загрязняющих клеток с использованием MAb, ассоциированных с клонами, которые не связываются с дендритными клетками (1), также может быть достигнуто с использованием методов истощения, опосредованного магнитными шариками (см. Альтернативный протокол) или пэннинга. Если требуется полная чистота, следует провести сортировку клеток. Из-за различий в протоколах в каждой лаборатории эти процедуры могут нуждаться в некоторой оптимизации, чтобы изолировать максимальное количество дендритных клеток.Важно всегда начинать с достаточного количества мононуклеарных клеток, например, присутствующих в пакетах для лейкафереза или лейкоцитарных пленках от доноров для лейкафереза, чтобы обеспечить оптимальную изоляцию клеток и достаточный выход клеток.

Истощение загрязняющих клеток из препаратов дендритных клеток с помощью процедур, опосредованных Fc-рецептором, является высокоэффективным. Однако авторы обнаружили, что дендритные клетки экспрессируют Fc-рецепторы CD32 и CD64 (Fanger et al., 1996), поэтому эти процедуры выделения могут ограничивать гетерогенность полученных препаратов дендритных клеток.Кроме того, зрелые дендритные клетки экспрессируют рецептор эритроцитов овцы, CD2 (Zhou and Tedder, 1995a). Хотя возможно, что некоторые дендритные клетки могут быть истощены из E-розетко-негативной фракции мононуклеаров крови путем образования розеток с овечьими эритроцитами, уровни экспрессии CD2 низки и могут быть недостаточными для эффективного формирования розетки.

Соображения по времени

В Базовом протоколе 1 требуется от 5 до 6 часов работы в первый день процедуры, от выделения мононуклеарных клеток крови до ночной инкубации мононуклеарных клеток в культуральных чашках.На второй день для обогащения дендритных клеток градиентами метризамида с последующими дополнительными процедурами прилипания и пэннинга требуется от 4 до 6 часов. Можно ввести много ярлыков, но они обычно приводят к снижению выхода или чистоты конечного препарата клеток, поэтому лучше всего тщательно следовать протоколам, как указано. Использование магнитных шариков может ускорить процедуры отрицательной и положительной изоляции, как указано в Альтернативном протоколе.

Выделение дендритных клеток из моноцитов, индуцированных GM-CSF/IL-4/TNF-α, или препаратов тотальных мононуклеарных клеток (см. Основной протокол 2) занимает меньше времени.Эта процедура требует 8-дневного периода культивирования клеток в дополнение к времени, затрачиваемому на подготовку клеток, и является более дорогим подходом из-за стоимости рекомбинантных цитокинов. Тем не менее, получение дендритных клеток из моноцитов может дать значительное количество клеток и довольно гомогенную популяцию дендритных клеток, что имеет значительные преимущества для некоторых приложений.

Как описано выше, образование ДК из прикрепленных моноцитов занимает 8 дней от начала до конца, если начать с лейкафереза.День 1, как правило, занимает весь день, начиная с обработки образца лейкафереза (от 3 до 4 часов) и заканчивая культивированием ДК (1 час для прилипания, а затем добавление среды в колбы ДК партиями по 10). Восстановление РВМС у больных может варьировать в широких пределах и колебаться в пределах 80–140 × 10 ⁸ клеток за ферез. Количество времени увеличивается из-за количества обрабатываемых клеток, которое может варьироваться от 40 до 70 колб Т-150 для культуры ткани для генерации ДК).

Сбор ДК на 7-й день и их посев для созревания также требуют много времени из-за большого объема обрабатываемых клеток.Эта работа должна быть ограничена 10 колбами культуры ткани Т-150 за один раз в боксе биобезопасности. Лучше всего выделить до 1 часа для каждой партии из 10 колб Т-150 с культурой ткани, с момента сбора ДК (включая 15–20 минут для буфера для диссоциации клеток), промывки клеток, их подсчета и последующего культивирования ДК в среда для созревания (данный номер не включает время, необходимое для загрузки ДК антигеном). Сбор ДК, подсчет и замораживание ДК с импульсным или неимпульсным антигеном также займет примерно 40–60 минут для 10 флаконов для клеточных культур Т-150.

Выявление болезненных состояний человека методом одноклеточного морфореологического фенотипирования крови

1) Авторы злоупотребляют аббревиатурой БОЛЬШЕ, особенно в подписях. Они должны заменить их текстом, в котором подчеркивается новая биологическая находка или изученная концепция. Кроме того, авторы должны выделить то, что является научно новым для хорошо зарекомендовавшей себя области гемореологии.

Мы должны признать, что нам очень нравится аббревиатура MORE, и мы, возможно, увлеклись, но, конечно, видим, что непредвзятому читателю она может показаться чрезмерно используемой.Мы удалили его из всех подписей и модерировали его использование.

Вклад нашего метода в хорошо зарекомендовавшую себя область гемореологии заключается в том, что он может предоставлять механические данные обо всех отдельных клетках крови непосредственно в цельной крови и без предварительного разделения. Это позволяет гораздо более конкретно исследовать индивидуальный вклад каждого типа клеток крови в общие реологические свойства крови, что до сих пор было невозможно. Мы дополнительно подчеркнули этот аспект в исправленной рукописи.

2) Статистическая значимость и достоверность должны быть уточнены в разных местах.
— Рисунок 3D — Количество клеток EBV не указано. Кроме того, авторы определяют n как количество независимых экспериментов. Отражает ли это количество пациентов или одни и те же клетки пациентов, измеренные в независимых экспериментах? Было бы полезно показать распределение отдельных клеток для EBV, учитывая направленность статьи.

Возможно, в упомянутой панели рисунка произошла путаница.На рисунке 3D фактически показан пример измерения популяции нейтрофильных гранулоцитов здорового донора и пациента, страдающего инфекцией дыхательных путей (не ВЭБ). В обоих случаях количество измеренных отдельных ячеек указывается непосредственно в легенде.

Как правило, «n» — это количество независимых повторов измерения. Если это конкретно означает разных доноров/пациентов, мы прямо указываем это во всех соответствующих местах рукописи.

Мы полностью согласны с тем, что распределения одиночных клеток в типичном измерении крови пациента с EBV отсутствовали, и их отображение улучшает бумагу, делая ее максимально прозрачной.Поэтому мы добавили примерные распределения отдельных клеток для нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов здорового донора и пациентов с ОПЛ, ИРТ и ВЭБ в качестве нового рисунка 3 — дополнение к рисунку 4. Обратите внимание, что в дополнение к примерным распределениям, показанным в рукописи, все необработанные данные, лежащие в основе обработанных графиков, которые для ясности содержат только медианы, доступны в виде файлов TDMS по запросу и могут быть проанализированы с помощью программного обеспечения ShapeOut с открытым исходным кодом. Теперь это было явно указано в разделе методов.

— Авторы должны прокомментировать полезность и статистическую значимость измерений деформации на рисунке 4D для 4-6 пациентов с ОМЛ или ОЛЛ, поскольку данные о деформации практически ничего не добавляют, кроме измерений размера клеток.

Диагностическая полезность морфореологического анализа крови больного лейкемией заключается прежде всего в выявлении необычных клеточных популяций (незрелых бластных клеток) в цельной крови (см. рис. 4A, B, C), которые будут полезны для помощи и дополнения первоначальной диагностики. .После идентификации с помощью соответствующего стробирования можно также учитывать их механические свойства (графики зависимости деформации от размера, рис. 4D). В настоящее время это в первую очередь направлено на установление связи с устоявшейся областью механики раковых клеток, которая до сих пор в основном имеет дело с солидными опухолями. Несколько экспериментов, проведенных на лейкемических клетках, были возможны только либо для иммортализованных клеточных линий, либо для специально выделенных клеток (см. соответствующие ссылки в тексте). Наши результаты подтверждают составную картину, возникшую в результате этих предыдущих исследований, — что и лимфатические, и миелоидные бластные клетки более жесткие (!), чем их здоровые аналоги — впервые в реальных образцах пациентов и без предварительной изоляции.Мы понимаем, что описание этих результатов могло быть неясным и запутанным, ссылаясь на то, насколько сильно должны были деформироваться клетки при одинаковых или разных размерах. Благодаря недавнему прогрессу в численном моделировании деформации клеток в узких каналах (см. Mokbel et al., 2017), теперь мы можем также рассчитать кажущийся модуль Юнга лейкоцитов. Ранее это было невозможно с помощью аналитической модели (Mietke et al., 2015), поскольку лейкоциты были слишком малы и/или слишком деформированы, чтобы их можно было зафиксировать в модели.Теперь мы добавили линии изоэластичности между 0,55 кПа и 1,1 кПа на рис. 4D для лучшей параметризации пространства деформации и размера и для того, чтобы подчеркнуть механическое различие между бластными клетками ALL и AML по сравнению с подтипами лейкоцитов в норме, а также по сравнению друг с другом. В дополнение к существующей панели рисунка 4 (дополнение 1 к рисунку), на которой сравниваются деформация и размер клеток ВСЕХ бластов с лимфоцитами, а также бластов ОМЛ с нейтрофилами, моноцитами и эозинофилами, была добавлена новая панель, сравнивающая кажущиеся модули Юнга этих ячеек, включая их статистическую значимость.Раздел «Методы» был расширен для описания расчета модулей Юнга, и основной текст был соответствующим образом изменен, чтобы прояснить утверждение о механических различиях. Мы надеемся, что это отвечает точке зрения рецензентов, но хотим подчеркнуть, что основное внимание в этой рукописи уделяется не подробной механической характеристике отдельных клеток (которую мы теперь добавили для конкретных примеров по запросу рецензентов), а выявлению закономерностей. видны на диаграммах разброса размеров деформации — морфореологический отпечаток пальца — для выявления болезненных состояний.

— Учитывая, что рисунок 4E-H представляет собой временной ряд, полученный только от одного пациента, важно, по крайней мере, предоставить меры статистической значимости и достоверности. Каждая точка данных является медианой для данного дня, поэтому планки погрешностей следует добавлять для каждого дня. К каждой точке данных, отличной от первой, можно добавить звездочку или какую-либо другую схему. Что еще более важно, учитывая, что это новый метод, некоторый тип ежедневного стандарта (т. е. нормальный контроль) должен был выполняться и отображаться параллельно с измерениями пациента.Знание того, как эти данные сравниваются с обычными биомаркерами/существующими методами анализа после лечения, было бы полезно для сравнительного анализа RTDC.

Мы согласны с тем, что мера достоверности для каждой отдельной точки данных, показанной на рисунке 4H, была бы полезной и уместной. Однако простое добавление планок ошибок к медианным точкам или вычисление статистической значимости разницы между двумя точками данных неприемлемо по следующим причинам:

i) Поскольку одна точка данных на рисунке 4H представляет собой медиану измеренной популяции от 1000 до 13000 клеток, это значение является очень точным.Столбики погрешностей, отображающие стандартную ошибку среднего (или эквивалента), исчезли бы за символами медианы, поскольку относительная ошибка всегда меньше 1% (и в большинстве случаев намного меньше 1%) в обоих направлениях — размер ячейки и деформация. Более того, отображение планок погрешностей в виде стандартного отклонения не добавит информации ни о статистической достоверности, ни о достоверности. Это только добавит информацию о распространении отдельных популяций, информацию, которую также можно найти в фактическом распределении, показанном на панелях E-G, и затруднит чтение панели H.

ii) По той же причине, что и для очень четко определенных популяций с тысячами основных точек данных, любое различие между двумя измерениями всегда будет очень значительным. Например, измерения на 7-й и 8-й день (две точки, наиболее близкие друг к другу на этой панели) статистически значимо различаются как по размеру клеток, так и по деформации со значением p < 10 ^-4 . Это очень ясно показывает беспрецедентную мощь метода, скажем, по сравнению с измерениями АСМ.Само количество сделанных измерений делает любую разницу значимой.

Вместо этого, как также предлагалось рецензентами, более важным и актуальным был бы нормальный стандарт надежности измерения выборки. Хотя у нас нет измерений нормальных контрольных образцов, взятых в те же дни, что и образцы пациентов, мы выполнили обширные контрольные измерения для стабильности и надежности метода (см. Рисунок 1E и Рисунок 1 — дополнение к рисунку 4, 5, 6). . Их можно использовать для получения доверительной области для одного измерения.Эта доверительная область учитывает поведение определенного типа клеток и различия между повторными измерениями одного и того же донора на техническом уровне (например, при обработке образцов), а также на биологическом уровне. Такие области достоверности можно рассчитать на основе повторных измерений двух доноров, показанных на рисунке 1 — дополнение к рисунку 6. К этому рисунку были добавлены панели GI, которые показывают области достоверности 68% и 95% одного эксперимента для нейтрофилов, моноцитов и лимфоциты.Затем была использована доверительная область для лимфоцитов и добавлена к рисунку 4H в четырех точках данных (день 1, 4, 8 и 12), чтобы можно было лучше судить о степени изменения во время эволюции этого временного курса. и в то же время сохранить разборчивость рисунка.

Обычные биомаркеры и существующие методы анализа лейкемии:

1) Морфологический анализ – высушенных на воздухе по Романовскому (Райт, Райт-Гимза или Май-Грюнвальд-Гимза) мазков крови или костного мозга.Морфологические признаки, выявленные при микроскопическом исследовании, могут свидетельствовать о лимфоидной или миелоидной дифференцировке лейкозных клеток, но, за исключением идентификации палочек Ауэра в миелобластах, ни один из этих признаков не является линейно-специфическим. Субклоны можно идентифицировать по различиям в размере и морфологическим особенностям (например, по цитоплазматическим вакуолям). Время, необходимое для анализа, составляет 1 – 2 часа. Необходимое количество материала: 100 мкл. Затраты относительно низкие (оценка: 5 €).

2) Цитохимическое окрашивание — повышает точность и воспроизводимость оценки происхождения и, следовательно, требуется для традиционной подклассификации острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) в соответствии с франко-американо-британскими (FAB) и критериями ВОЗ. Судан черный и красители на миелопероксидазу (МПО) для идентификации миелобластов и красители на эстеразы, такие как α-нафтилбутират, для идентификации монобластов остаются полезными в этом отношении. Время, необходимое для анализа, составляет 1 – 2 часа. Окрашивание должно быть выполнено без неоправданной задержки, так как МПО нестабилен и становится незаметным после недели хранения.Необходимое количество материала: 100 мкл. Затраты относительно низкие (оценка: 5-10 евро).

3) Иммунофенотипическая классификация – основана на идентификации эпитопов клеточной поверхности или цитоплазматических белков с помощью антител, меченных флуоресцентным красителем. Проточная цитометрия (анализ FACS) в настоящее время широко используется как особенно мощный метод, поскольку многопараметрический анализ дает преимущество в отделении лейкемических клеток от неопухолевых клеток. Таким образом, экспресс-анализ позволяет установить происхождение лейкемии (т.г. миелоидный по сравнению с лимфоидным), его стадия дифференцировки (например, T-по сравнению с B-ALL) и облегчает мониторинг минимальной остаточной болезни (MRD) с использованием специфического для лейкемии набора маркеров, не экспрессируемых в этой комбинации на обычных клетках крови или костного мозга. Примечательно, что некоторые предшественники В-клеточного ОЛЛ могут быть отрицательными по CD45 (общий лейкоцитарный антиген) или у пациентов с Т-ОЛЛ отсутствует экспрессия TdT или CD34. Хотя ВСЕ можно классифицировать в соответствии со стадией созревания, оптимальная иммунологическая подклассификация остается предметом дискуссий.Многие ОЛЛ также аберрантно экспрессируют антигены, связанные с миелоидным клоном (в основном CD13, CD33). Таким образом, панель скрининга антител для острых лейкозов должна включать по крайней мере один очень чувствительный и один относительно специфичный маркер для каждой гемопоэтической и лимфоидной линии. Необходимое количество материала: 100 мкл – 1 мл. Метод может потребовать от 1 до 4 часов времени. Затраты следует учитывать в зависимости от количества используемых антител (оценка: 100–500 евро).

4) Молекулярная (генетическая) классификация – с помощью традиционных методов выявляются специфические цитогенетические и/или молекулярные аномалии в 60–80% случаев ОЛЛ и 50–60% случаев ОМЛ.Недавнее появление полногеномного анализа позволило классифицировать практически все острые лейкозы в соответствии со специфическими генетическими аномалиями. Маркеры можно разделить на специфичные для лейкемии (например, BCR-ABL1; t(15;18)) или специфичные для лейкозных клонов (например, перестройки генов тяжелой цепи Ig, перестройки генов Т-клеточного рецептора). Оба являются ценными для классификации в качестве прогностических показателей при применении определенного лечения и в настоящее время обычно используются для мониторинга МОБ за счет использования высокой чувствительности основанной на ПЦР амплификации определенных последовательностей генов.Этот метод требует много времени (1–10 дней) и дорог (оценка: 500–5000 евро) и обычно выполняется только в референс-лабораториях.

Как показано в таблице 1 ниже, по сравнению с этими общепринятыми традиционными методами преимущества морфореологического фенотипирования заключаются в очень коротком времени анализа и минимальном количестве требуемой крови. Метод имеет сравнимую эффективность в отношении идентификации лейкемических клеток и идентификации лейкемических субклонов.Его применимость для классификации лейкемической линии (например, по значительным различиям в размере, деформации и модуле Юнга; см. рис. 4 — дополнение к рисунку 1) и для обнаружения небольшого количества лейкозных клеток теоретически можно ожидать, и это уже было продемонстрировано в единичных случаях. , но еще предстоит проверить и доказать в формальном сравнении, которое выходит за рамки настоящего исследования.

Таблица 1: Сравнение обычных маркеров лейкемии с анализом MORE

⁴5 1 — 10 дней

Выпуск Metho- Дологии 8 9	Определение лейкозных клеток	Определение лейкозных субклон	Классификация лейкозной линии	ниже предела для обнаружения MRD	Требуемое количество материала	Время, необходимое для анализа	Приблиз.Стоимость ANA-LISISE [€]

		Да	Да	Только если на основании Morpho-Logical Rence	неопределенный	1 / 1×10 ²	100 мкл	1 — 2 ч	5	5	9
9 9 Окрашивание	Да	Да	Да	1 / 1×10 ²	100 мкл	1 -2 ч	10
FACS Анализ	Да	Да	Да	1 / 5×10 ³8 — 1×10 ⁴	100 — 1000 мкл	1 — 4 ч	100 — 500
Молекулярный анализ	Да	Да	Да	Да	1 / 1×10 ⁴8 — 1×10 ⁶ 6 ⁶	5 — 10 мл	500 — 5 000
Больше анализа	Да	Да	Возможные, но еще не формально проверены	возможные, но еще не формально проверены	10 мкл	30 мин

Сокращения: FACS Флуоресцентное сканирование клеток; МОБ минимальная остаточная болезнь; БОЛЕЕ морфореологический

Ответ на лечение является одним из самых мощных прогностических маркеров выживания при лейкемии «in vivo».При ОЛЛ у детей количество бластов на 8-й день после начала лечения метилпреднизолоном является прогностическим фактором частоты рецидивов (< 1000 бластов/мкл крови: частота рецидивов 20–30%; >1000 бластов/мкл крови: частота рецидивов 50–80). %). Поскольку в настоящее время для мониторинга эффектов лечения метилпреднизолоном у ВСЕХ в течение первых 12 дней используется только морфологический анализ, анализ MORE дает, по крайней мере, ту же информацию об успехе лечения за более короткий промежуток времени и с меньшими размерами требуемой выборки.Потенциально реологические особенности бластных клеток могут представлять собой дополнительные прогностические биомаркеры для лейкозных клеток (жесткость может коррелировать с чувствительностью или рефрактерностью к лекарственным препаратам или идентифицировать лейкемический субклон), что станет предметом будущих исследований. Таким образом, морфореологическое фенотипирование очень хорошо сравнивается с установленными биомаркерами для отслеживания ВСЕХ результатов лечения. Мы добавили краткое описание этих аспектов в исправленную рукопись и приложили сравнительную таблицу в качестве дополнительного файла 2.

3) На рис. 2D, E показаны контрольные группы и экспонированные, но затем данные, показанные на рис. 2F, также включают инфицированных. Читателю следует разъяснить разницу и актуальность заболевания для подвергшихся воздействию и инфицированных групп населения.

Мы благодарим рецензентов за этот комментарий, который помогает нам прояснить экспериментальную процедуру. То, что мы называем «выставленным», представляет собой образец эритроцитов с присутствующими в образце жизненно важными паразитами Plasmodium falciparum . Из всех эритроцитов только небольшой процент клеток действительно инфицирован паразитом (процент инфицированных клеток называется паразитемией и выражается в процентах).Это верно как для нашего эксперимента in vitro, так и для ситуации, связанной с заболеванием in vivo (хотя паразитемии in vivo обычно меньше, чем здесь). Итак, на рисунке 2E фактически показано распределение деформации и размера в подвергшейся воздействию популяции (открытые клетки показаны синими точками), а несколько инфицированных клеток (обозначенных белым элементом изображения, показанным на вставке) отмечены красными точками. Затем на рисунке 2F показан анализ средней деформации всех контрольных (черный, рисунок 2D), экспонированных (синий, рисунок 2E) и фактически инфицированных (красный, рисунок 2E) клеток в течение 46 часов эксперимента.Мы переименовали ось X на рис. 2F (и на рис. 2 — дополнение 2 к рисунку) как «время инкубации» (а не «время после заражения») и изменили основной текст, подпись к рисунку и описание методов, чтобы разница между экспонированными и зараженными четче.

Авторы заявляют о большем уменьшении деформации инфицированных клеток по сравнению со всей подвергшейся воздействию популяции (рис. 2F), что может быть объяснено удалением жестких клеток селезенкой. Но если селезенка отфильтровывает более жесткие клетки, это приведет к меньшему уменьшению деформации.

Это ценное замечание. Кажущееся противоречие можно разрешить, указав, что наши эксперименты проводились in vitro и мы не анализировали кровь, фактически взятую у больных малярией. Комментарий об удалении селезенкой более жестких клеток относится к экстраполяции наших результатов in vitro на ситуацию in vivo. Мы уточнили предложение в основном тексте, чтобы избежать путаницы, и мы с нетерпением ждем возможности исследовать гемореологические изменения паразитемии in vivo и тем самым дополнительно оценить диагностическую ценность для пациентов с малярией.

Неясно, почему были выполнены процедуры 2BP и PA. Читателю было бы полезно прояснить мотивацию этих методов лечения, поскольку они связаны с инфекцией pf.

Мы понимаем, что эксперименты с 2BP и PA не были хорошо мотивированы. Снижение взаимодействия мембрана-цитоскелет ранее коррелировало с эллиптоцитарными эритроцитами и устойчивостью к P.f. инфекции (Чишти и др., 1996). Характерную двояковогнутую морфологию эритроцитов можно химически изменить с помощью 2-бромпальмитата (2BP), эффективного ингибитора пальмитоилацилтрансфераз (PAT) (Lach et al., 2012). 2BP обычно используется для ингибирования пальмитоилирования белков, но следует также отметить, что он является аналогом пальмитиновой кислоты (PA) и поэтому легко распределяется в мембранах. Поскольку он используется в относительно высоких концентрациях (100 мкМ), он может значительно изменить биофизические свойства мембран, в которых он накапливается. Чтобы различать эти два эффекта, мы использовали пальмитиновую кислоту, которая, как и 2BP, будет накапливаться в мембранах, но не будет ингибировать пальмитоилирование белков.В этом отношении наши данные ясно указывают на то, что пальмитоилирование белков эритроцитов, а не накопление «жирных кислот» в мембранах, имеет решающее значение для инфекционности P. f. Мы изменили основной текст, чтобы прояснить обоснование этих экспериментов.

4) Подраздел «БОЛЬШЕ анализа лейкоцитов» каковы сроки механических измерений активированных нейтрофилов, опубликованных в более ранних отчетах? Если измерения проводились в разные моменты времени, разными методами, деформирующими клетки в совершенно разных временных масштабах, то это не кажется конфликтом.

Опять же, очень ценный комментарий. Мы искали случаи, когда эффект стимуляции fMLP определялся в более старых отчетах. В Worthen et al., 1989, обработка fMLP проводилась в течение 30 секунд при различных концентрациях, но время измерения не сообщается. Поскольку 30–80 клеток были измерены вручную с помощью клеточного покера, следует предположить, что продолжительность эксперимента покрывает всю шкалу времени, оцененную в наших экспериментах (0–60 мин). Точно так же в Rosenbluth et al., 2008 нейтрофилы подвергались воздействию 10 нг/мл fMLP в течение 5 минут, но не сообщается, насколько позже были проведены измерения. В обоих этих исследованиях сообщалось об ужесточении. Единственное другое известное нам исследование, в котором сообщается о размягчении, было Gossett et al., 2012. Однако нейтрофилы стимулировались в течение 45 минут, поэтому первоначальное ужесточение, обнаруженное другими отчетами (и нами), могло быть пропущено. Кроме того, концентрация fMLP 10 мкМ, использованная Gossett al. является довольно высоким и нефизиологичным и делает нейтрофилы неспособными к депримированию.Эти моменты, в дополнение к тому факту, что разные методы исследуют клетки в совершенно разных временных масштабах, как правильно заявляют рецензенты, разные способы тестирования (см. Ravetto et al., 2014) и потенциально разные уровни предварительной активации из-за выделение нейтрофилов из цельной крови, необходимое для предыдущих методов (см. также новые результаты, добавленные в ответ на один из незначительных комментариев ниже; рисунок 1 — дополнение к рисунку 3), делает предполагаемый конфликт, как указано в исходной рукописи, несущественным.

Нейтрофилы были менее деформируемы после лечения fMLP, но становились более деформируемыми и крупнее в более длительные моменты времени. Учитывая, что «крупные клетки одинаковой жесткости должны больше деформироваться в RTDC» (подраздел «БОЛЬШЕ анализа злокачественно трансформированных клеток крови»), как эти результаты могут показать, что более крупные клетки fMLP менее деформируемы? Если более крупные клетки больше деформируются в RTDC (и при деформации инерционными потоками, как в Gossett et al.), то это трудно сравнивать с предыдущими методами.

Очень хороший момент. Мы не были достаточно осторожны, описывая клетки только как более или менее «деформированные», и случайно упомянули здесь «деформируемые». Как указывалось выше, теперь мы можем рассчитать кажущийся модуль Юнга этих клеток и принять во внимание комбинированное изменение размера и деформации. Действительно, сначала наблюдается значительное увеличение модуля Юнга в течение первых 15 минут, которое затем снова падает до немного ниже исходного значения (хотя разница с предыдущим значением незначительна).Принимая во внимание это и предыдущий пункт, мы удалили любое упоминание о кажущемся противоречии между предыдущими результатами и вместо этого более подробно описываем фактические механические изменения с временным разрешением, происходящие в течение первого часа активации нейтрофилов, о которых никогда не сообщалось. до.

https://doi.org/10.7554/eLife.29213.032
Спектроскопия с ограниченным вращением Фарадея с дробовым шумом для обнаружения изотопов оксида азота в дыхании, моче и крови
Crutzen, P.J. Влияние оксидов азота на содержание атмосферного озона. кв. Дж. Р. Мет. соц. 96, 320–325 (1970).
ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google Scholar
Eiserich, J.P. et al. Образование миелопероксидазой в нейтрофилах воспалительных оксидантов, производных оксида азота. Природа 391, 393–397 (1998).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Озкан М.и Двайк, Р. А. Оксид азота и реактивность дыхательных путей. Клиническая легочная медицина 8, 199 (2001).
Артикул Google Scholar
Гроб, Н. М. и Двейк, Р. А. Выдыхаемый оксид азота при астме. От диагностики к мониторингу и скринингу: мы уже на месте? Сундук 133, 837–839 (2008).
Артикул Google Scholar
Натан, К. Оксид азота как секреторный продукт клеток млекопитающих.Журнал Faseb 6, 3051–3064 (1992).
КАС Статья Google Scholar
Mailman, D., Guntuku, S., Bhuiyan, M.B.A. & Murad, F. Участки органов липополисахарид-индуцированной продукции оксида азота у анестезированной крысы. Оксид азота-Биол, гл. 5, 243–251 (2001).
КАС Статья Google Scholar
Бхуиян, М. Б., Мурад, Ф. и Фант, М. Плацентарная холинергическая система: локализация в цитотрофобласте и модуляция оксида азота.Сотовая связь и сигнализация 4, 4, 10.1186/1478-811X-4-4 (2006).
КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar
van Eijk, H.M.H., Luiking, Y.C. & Deutz, N.E.P. Методы с использованием стабильных изотопов для измерения синтеза оксида азота (NO) в цепи L-аргинин/NO в норме и при заболеваниях. Журнал хроматографии B 851, 172–185, 10.1016/j.jchromb.2006.08.054 (2007).
КАС Статья Google Scholar
Серво, М., Stephan, BCM, Feelisch, M. & Bluck, LJC. Измерение синтеза оксида азота in vivo у людей с использованием методов стабильных изотопов: систематический обзор. Свободнорадикальная биология и медицина 51, 795–804, 10.1016/j.freeradbiomed.2011.05.032 (2011).
КАС Статья пабмед Google Scholar
Фонтейн, А., Сабадель, А. Дж. и Ронко, Р. Дж. Гомогенное хемилюминесцентное измерение оксида азота с озоном – значение для непрерывного селективного мониторинга газообразных загрязнителей воздуха.Anal Chem 42, 575–& (1970).
КАС Статья Google Scholar
Hemmingsson, T., Linnarsson, D. & Gambert, R. Новое портативное устройство для анализа выдыхаемого оксида азота в исследованиях и клинических применениях. Журнал клинического мониторинга и вычислений 18, 379–387 (2004).
Артикул Google Scholar
Шорт, Л. К., Фрей, Р. и Бентер, Т.Анализ выдыхаемого воздуха в режиме реального времени с помощью многофотонной ионизации-масс-спектрометрии с резонансным усилением и лазерной ионизацией среднего давления Источник: наблюдаемый профиль оксида азота. заявл. Спектроск. 60, 217–222 (2006).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Wang, C.J. & Sahay, P. Анализ дыхания с использованием методов лазерной спектроскопии: биомаркеры дыхания, спектральные отпечатки пальцев и пределы обнаружения. Sensors-Basel 9, 8230–8262 (2009).
КАС Статья Google Scholar
Fritsch, T. et al. Обнаружение NO в биологических образцах: дифференциация (NO)-N-14 и (NO)-N-15 с помощью инфракрасной лазерной спектроскопии. Оксид азота-Биол, гл. 19, 50–56 (2008).
КАС Статья Google Scholar
Mitscherling, C. et al. Неинвазивная и изотопно-селективная лазерно-индуцированная флуоресцентная спектроскопия оксида азота в выдыхаемом воздухе.J Breath Res 1, 026003 (2007).
Артикул Google Scholar
Нельсон, Д. Д. и др. Характеристика непрерывного квантово-каскадного лазера с температурой, близкой к комнатной, для долгосрочного автоматического мониторинга оксида азота в атмосфере. Opt Lett 31, 2012–2014 (2006).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Хальмер Д., фон Басум Г., Хорстянн М., Hering, P. & Murtz, M. Одновременное обнаружение (NO)-N-14 и (NO)-N-15 с временным разрешением с помощью спектроскопии утечки из резонатора в среднем инфракрасном диапазоне. Изот Энвайрон Хелт С 41, 303–311 (2005).
КАС Статья Google Scholar
Маккарди, М. Р., Бахиркин, Ю., Высоцкий, Г. и Титтель, Ф. К. Характеристики датчика выдыхаемого оксида азота и углекислого газа с использованием квантово-каскадного лазера на основе интегрированной выходной спектроскопии резонатора. J Biomed Opt 12, 034034-034034-034039 (2007).
Артикул Google Scholar
Литфин Г., Поллок С. Р., Керл Р. Ф. мл. и Титтел Ф. К. Повышение чувствительности лазерной абсорбционной спектроскопии за счет эффекта магнитного вращения. Журнал химической физики 72, 6602–6605 (1980).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Смит, Дж. М., Блох, Дж. К., Филд, Р. В. и Стейнфельд, Дж. Л. Обнаружение следов NO2 с помощью магнитно-вращательной спектроскопии с усилением частотной модуляции.J Opt Soc Am B 12, 964–969 (1995).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Бреча, Р. Дж., Педротти, Л. М. и Краузе, Д. Магнитно-вращательная спектроскопия молекулярного кислорода с помощью диодного лазера. J Opt Soc Am B 14, 1921–1930, 10.1364/Josab.14.001921 (1997).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Гансер, Х., Урбан, В. и Браун, А.M. Чувствительное обнаружение NO методом фарадеевской модуляционной спектроскопии с квантово-каскадным лазером. Mol Phys 101, 545–550 (2003).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Левицки Р., Керл Р. Ф., Доти Дж. Х., Титтел Ф. К. и Высоцки Г. Сверхчувствительное обнаружение оксида азота на длине волны 5,33 мкм с использованием спектроскопии с вращением Фарадея на основе квантово-каскадного лазера с внешним резонатором. P Natl Acad Sci USA 106, 12587–12592 (2009).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Брумфилд, Б. и Высоцки, Г. Спектроскопия с вращением Фарадея на основе постоянных магнитов для чувствительного обнаружения кислорода в атмосферных условиях. Оптика Экспресс 20, 29727–29742 (2012).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Мурц, М. и др. Спектроскопия с магнитной модуляцией Фарадея полосы 1-0 (NO)-N-14 и (NO)-N-15.Appl Phys B-Lasers O 93, 713–723 (2008).
ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google Scholar
Дарри Г., Пуше И., Амаруш Н., Данги Т. и Меги Г. Двухлучевой детектор с ограничением дробового шума для мониторинга газовых примесей в атмосфере с помощью диодных лазеров ближнего инфракрасного диапазона. Прикладная оптика 39, 5609–5619 (2000).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Хоббс, П.С.Д. и Халлер, К.Л. Двухлучевая лазерная абсорбционная спектроскопия: характеристики с ограниченным дробовым шумом в основной полосе частот с новым электронным шумоподавителем. в оптических методах сверхчувствительного обнаружения и анализа: методы и приложения, B.L. Fearey, изд., Proc. SPIE 1435, 298–309 (1991).
ОБЪЯВЛЕНИЕ Google Scholar
Hobbs, PCD. Оптические измерения с ограничением дробового шума в основной полосе частот с помощью шумных лазеров. в «Лазерном шуме», Р.Рой, изд., Proc. SPIE 1376, 216–221, 10.1117/12.25014 (1991).
ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google Scholar
Ван, Ю., Высоцкий, Г.А., Лайон, С.К.М., Гмахл, К.К.М. и Высоцкий, Г.К.М. Разработка новых спектрометров среднего инфракрасного диапазона на основе квантовых каскадных лазеров, докторская диссертация, Принстонский университет (2014).
Wang, Y., Nikodem, M. & Wysocki, G. Безкриогенный гетеродинный спектрометр с вращением Фарадея в среднем инфракрасном диапазоне.Оптика Экспресс 21, 740–755 (2013).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Westberg, J. et al. Количественное описание спектрометрии модуляции Фарадея с точки зрения интегральной силы линии и 1-го коэффициента Фурье модулированной функции формы линии. J Quant Spectrosc Ra 111, 2415–2433 (2010).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Уилсон Г.В. Х. Модуляционное уширение форм линий ЯМР и ЭПР. J Appl Phys 34, 3276–& (1963).
Сабана, Х. и др. Одновременное обнаружение ¹⁴ NO и ¹⁵ NO с помощью модуляционной спектроскопии Фарадея. Прикладная физика B: лазеры и оптика 96, 535–544 (2009).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Kluczynski, P., Lundqvist, S., Westberg, J. & Axner, O. Фарадеевский вращательный спектрометр с временем отклика менее секунды для обнаружения оксида азота с использованием непрерывного квантового каскадного лазера DFB на 5.33 мкм. Appl Phys B-Lasers O 103, 451–459 (2011).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
McManus, J.B. et al. Применение квантовых каскадных лазеров для высокоточных измерений газовых примесей в атмосфере. Оптическая техника 49, 111124–111124, 10.1117/1.3498782 (2010).
КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar
Рекомендации ATS/ERS по стандартизированным процедурам онлайн и оффлайн измерения оксида азота в выдыхаемых нижних дыхательных путях и оксида азота в носу, 2005 г.Am J Resp Crit Care 171, 912–930 (2005).
Браман, Р. С. и Хендрикс, С. А. Нанограммное определение нитритов и нитратов в экологических и биологических материалах восстановлением ванадия (III) с детектированием хемилюминесценции. Анальный. хим. 61 (1989).
Йейтс, Д. Х. Роль выдыхаемого оксида азота при астме. Immunol Cell Biol 79, 178–190 (2001).
КАС Статья Google Scholar
Ву, Г.Ю. и Моррис, С. М. Метаболизм аргинина: оксид азота и не только. Biochem J 336, 1–17 (1998).
КАС Статья Google Scholar
Границы | Реология крови: ключевые параметры, влияние на кровоток, роль в развитии серповидно-клеточной анемии и влияние упражнений
Сопротивление кровотоку и сердечно-сосудистая система
Скорость потока в данной трубке зависит от давления и сопротивления потоку. Согласно закону Пуазейля (Poiseuille, 1835 г.), гидравлическое сопротивление зависит от геометрии трубы [длины (L) и радиуса трубы (r)] и вязкости жидкости (η) и рассчитывается по следующей формуле:
R=8⁢η⁢Lπ⁢r4
При применении закона Пуазейля к сердечно-сосудистой системе необходимо учитывать радиус и длину сосудов, а также вязкость крови.Размеры сосудистой системы (прежде всего радиус, возведенный в четвертую степень) играют более важную роль в определении сосудистого сопротивления, чем вязкость крови. Однако несколько работ, проведенных за последние 10–15 лет, показали, что в физиологическом контексте параметры этого уравнения нельзя считать действительно независимыми друг от друга. Это потому, что сосуды не являются жесткими трубками; они могут изменять свой диаметр в ответ на различные физиологические раздражители.Одной из наиболее важных молекул, которая способствует увеличению диаметра сосудов (то есть расширению сосудов), является оксид азота (NO). Мартини и др. (2005), Tsai et al. (2005), Intaglietta (2009) и Sriram et al. (2012) показали, что увеличение гематокрита и вязкости крови от легкого до умеренного не приводило к повышению сосудистого сопротивления или артериального давления, а фактически вызывало противоположный эффект. Они также показали, что повышение вязкости крови способствует активации эндотелиальной NO-синтазы через механизмы, зависящие от напряжения сдвига, что приводит к увеличению продукции NO, компенсаторной вазодилатации и снижению артериального давления.Однако данные показывают, что эти сосудистые адаптации могут происходить только в функционирующей сосудистой системе со здоровым эндотелием. При наличии сосудистой дисфункции нарушается вазодилатация. Поэтому повышение вязкости крови не сопровождается усилением вазодилатации. В результате повышается сосудистое сопротивление и артериальное давление (Vazquez et al., 2010; Salazar Vazquez et al., 2011). Хотя роль вязкости крови в адаптации сосудов часто игнорируется, эти исследования ясно показывают, что геометрию сосудов и вязкость крови нельзя рассматривать отдельно при изучении регуляции сосудистого сопротивления у здоровых людей или у людей с сердечно-сосудистыми заболеваниями.
Кровь — не простая жидкость
Цельная кровь представляет собой двухфазную жидкость, состоящую из взвешенных в плазме клеточных элементов, водного раствора, содержащего органические молекулы, белки и соли (Baskurt and Meiselman, 2003). Клеточная фаза крови включает эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. Лейкоциты и тромбоциты могут влиять на реологию крови, но в нормальных условиях наибольшее влияние оказывают эритроциты (RBC) (Pop et al., 2002). Реологические свойства крови определяются физическими свойствами этих двух фаз и их относительным вкладом в общий объем крови.
Кровь представляет собой неньютоновскую разжижающую при сдвиге жидкость с тиксотропными и вязкоупругими свойствами. Многие справочники по сердечно-сосудистым заболеваниям считают нормальными значения вязкости крови от 3,5 до 5,5 сП. Однако вязкость крови нельзя обобщить одним значением. Благодаря свойству крови разжижаться при сдвиге, которое зависит от реологических свойств эритроцитов, вязкость этой жидкости изменяется в зависимости от гемодинамических условий. Та же самая кровь может иметь значение вязкости 60 сП при скорости сдвига 0.1 с ^–1 , тогда как вязкость будет 5 или 6 сП при скорости сдвига 200 с ^–1 . Это означает, что вязкость крови различна в крупных артериях, венах и микроциркуляторном русле, где скорость сдвига может варьироваться от нескольких с ^–1 до более чем 1000 с ^–1 (Connes et al., 2016). Вязкость крови зависит от нескольких факторов: гематокрита, вязкости плазмы, способности эритроцитов к деформации под действием тока и свойств агрегации-дезагрегации эритроцитов (Baskurt, Meiselman, 2003; Cokelet, Meiselman, 2007).
Влияние гематокрита
Вязкость цельной крови зависит от количества (и объема) эритроцитов в крови и, таким образом, линейно связана с гематокритом (Chien et al., 1975). Влияние гематокрита на вязкость крови намного выше при низких скоростях сдвига (например, вены), чем при высоких скоростях сдвига (например, в артериях) (Cokelet and Meiselman, 2007). Подсчитано, что при высокой скорости сдвига повышение гематокрита на одну единицу вызовет увеличение вязкости крови на 4% (если реологические свойства эритроцитов останутся прежними).
Вязкость плазмы
Плазма является ньютоновской жидкостью, что означает, что ее вязкость не зависит от скорости сдвига. Вязкость плазмы зависит от концентрации белков плазмы, таких как фибриноген, α1-глобулины, α2-глобулины, β-глобулины и γ-глобулины (Connes et al., 2008). Любое повышение концентрации этих белков может вызвать повышение вязкости плазмы и, следовательно, цельной крови (Kesmarky et al., 2008). Обычная плазма при 37 градусах Цельсия имеет вязкость около 1.2–1,3 сП, но эти значения могут быть выше при различных воспалительных, метаболических или сердечно-сосудистых заболеваниях (Kesmarky et al., 2008). Кроме того, повышенная вязкость плазмы связана с более высокой частотой нежелательных клинических явлений при нестабильной стенокардии и инсульте (Kesmarky et al., 2008).
РБК Деформируемость
Деформируемость эритроцитов является еще одним важным фактором, определяющим вязкость крови. Деформируемость эритроцитов зависит от нескольких факторов, включая внутреннюю (цитозольную) вязкость (в основном определяемую средней концентрацией клеточного гемоглобина), вязкоупругость мембраны (которая зависит от белков цитоскелета и свойств липидного бислоя) и отношение площади поверхности к объему. также называемая клеточной сферичностью) (Clark et al., 1983; Ренукс и др., 2019). При низких скоростях сдвига ригидные эритроциты менее склонны к агрегации, чем деформируемые эритроциты. Следовательно, потеря деформируемости эритроцитов при очень низких скоростях сдвига (менее 1 с ^-1 ) приводит к снижению вязкости крови (Chien et al., 1970). Напротив, при скоростях сдвига выше 1 с ^–1 уменьшение деформируемости эритроцитов приводит к увеличению вязкости крови (Chien et al., 1970).
Первоначальные эксперименты по анализу деформируемости эритроцитов в кровотоке проводились в 1970-х и 1980-х годах с использованием микропробирок (Goldsmith et al., 1972) и реоскопы (Fischer et al., 1978). Эти исследования продемонстрировали, что по мере увеличения напряжения сдвига нормальные эритроциты выравниваются с направлением потока, деформируясь в эллиптическую форму за счет движения клеточной мембраны вокруг цитоплазмы, напоминающего гусеницу (Schmid-Schonbein et al., 1969; Goldsmith et al., 1972; Fischer et al., 1978). С другой стороны, жесткие эритроциты не могут должным образом деформироваться в эллипс и оставаться перпендикулярными кровотоку, что приводит к увеличению сосудистого сопротивления. В этих фундаментальных экспериментах эритроциты были суспендированы в растворах, таких как декстроза, с более высокой вязкостью, чем внутренняя вязкость эритроцитов (Goldsmith et al., 1972; Фишер и др., 1978). Однако при течении эритроцитов в плазме in vivo вязкость плазмы ниже вязкости цитозоля эритроцита. Это важно, поскольку недавние эксперименты показывают, что поведение эритроцитов по принципу «ходьбы по резервуару» не возникает, когда эритроциты суспендированы в растворах с более низкой вязкостью, которые больше похожи на вязкость плазмы in vivo (Dupire et al., 2012). Вместо этого наблюдения Lanotte et al. (2016) показали, что эритроциты демонстрируют широкий спектр форм клеток для любого заданного состояния потока.Например, эритроциты в разбавленных суспензиях ведут себя как жесткие сплюснутые эллипсоиды при низких скоростях сдвига (<1 с ^–1 ). Затем, по мере увеличения скорости сдвига, эритроциты последовательно переворачиваются, скатываются и деформируются в стоматоциты и, в конечном счете, принимают сильно деформированные многодольчатые. Выводы Lanotte et al. (2016) предполагают, что патологические изменения множества параметров, включая состав плазмы, вязкость цитозоля эритроцитов и/или механические свойства мембран, могут способствовать патологическим реологии и кровотоку крови.Необходимо провести дальнейшие исследования, чтобы определить, как снижение деформируемости эритроцитов может повлиять на изменение формы эритроцитов.
Деформируемость эритроцитов также является ключевым фактором, определяющим кровоток в микроциркуляторном русле. Эритроциты представляют собой двояковогнутые диски со средним диаметром около 7–8 мкм. Капилляры могут иметь диаметр менее 5 мкм. Поэтому эритроциты должны обладать высокой деформируемостью, чтобы пройти через самые узкие сосуды микроциркуляторного русла. Было показано, что 15-процентное снижение деформируемости эритроцитов вызывает 75-процентное увеличение общего сопротивления кровотоку в изолированных перфузированных задних конечностях крыс (Baskurt et al., 2004). Более того, при перфузии легких собак ригидными эритроцитами повышалось общее легочное артериальное давление, причем основное повышение локализовалось в микроциркуляторном русле (Hakim, 1988; Raj et al., 1991). Действительно, любое снижение деформируемости эритроцитов может повлиять на сопротивление кровотоку, тканевую перфузию и оксигенацию (Parthasarathi and Lipowsky, 1999).
Агрегация РБК
Агрегация эритроцитов представляет собой обратимое образование трехмерных стопок эритроцитов, называемых «руло», которое происходит при низких скоростях сдвига.Этот уникальный процесс требует мало энергии и является обратимым в условиях высокой скорости сдвига. Агрегация эритроцитов зависит как от плазменных, так и от клеточных факторов. Первоначально большинство исследований образования агрегации эритроцитов было сосредоточено на влиянии уровня белка, типа полимера и концентрации. Более поздние исследования показали, что клеточные свойства эритроцитов могут также модулировать присущую клеткам тенденцию к агрегации (называемую агрегацией эритроцитов) (Baskurt and Meiselman, 2009). Например, поверхностные свойства эритроцитов, включая поверхностный заряд и глубину гликокаликса, также играют важную роль в этом процессе.Для объяснения механизмов агрегации эритроцитов были предложены две модели (Meiselman et al., 2007): модель истощения и модель образования мостиков. Модель истощения предполагает, что агрегаты эритроцитов образуются из-за осмотического давления окружающих белков плазмы или других макромолекул. Модель мостиков предполагает, что агрегаты формируются за счет «поперечных мостиков», состоящих из белков плазмы или других макромолекул (Rampling et al., 2004). Фибриноген является наиболее физиологически значимой макромолекулой, которая способствует агрегации эритроцитов (Rampling et al., 2004), но и другие молекулы, включая тромбоспондин и фактор фон Виллебранда, также играют роль (Nader et al., 2017).
Воздействие агрегации эритроцитов на кровоток, тканевую перфузию и сосудистое сопротивление является комплексным и зависит от сосудистых областей, по которым проходят агрегаты эритроцитов. Агрегаты эритроцитов обычно образуются в областях с низкой скоростью сдвига, например, в прожилках или бифуркациях. Следовательно, повышенная агрегация эритроцитов будет вызывать резкое повышение вязкости крови в этих зонах. Агрегаты эритроцитов дезагрегируются в областях с высокой скоростью сдвига, например, в артериях и артериолах.Однако было продемонстрировано, что некоторые агрегаты эритроцитов могут сохраняться в крупных артериях и влиять на динамику кровотока. Было показано, что повышенная агрегация эритроцитов способствует аксиальной миграции эритроцитов в этих сосудах, что, в свою очередь, увеличивает ширину свободного от клеток слоя (Baskurt and Meiselman, 2007). Это последнее явление имеет три основных последствия: (i) снижение кажущейся динамической вязкости крови и сопротивления потоку, (ii) снижение напряжения сдвига стенки, что, в свою очередь, приводит к более низкой активации эндотелиальной NO-синтазы, снижению продукции NO , и меньшая вазодилатация, и (iii) увеличение явления скимминга плазмы в бифуркациях, что, в свою очередь, снижает микроциркуляторный гематокрит и вязкость крови (эффекты Фареуса и Фареуса-Линдквиста).
На микроциркуляторном уровне персистирующие агрегаты эритроцитов могут повышать прекапиллярное сопротивление. Эксперименты, проведенные на больших стеклянных пробирках, также показали, что влияние агрегации эритроцитов на сопротивление потоку зависит от ориентации пробирки (вертикальная или горизонтальная) (Cokelet and Goldsmith, 1991). В горизонтальных пробирках повышенная агрегация эритроцитов увеличивает седиментацию эритроцитов, тем самым увеличивая сопротивление потоку. С другой стороны, в вертикальных трубках агрегация эритроцитов увеличивает осевую миграцию эритроцитов и облегчает кровоток.По этой причине трудно предсказать последствия повышенной агрегации эритроцитов для кровотока. Однако эксперименты, проведенные на целых органах, таких как сердце морской свинки, показали, что постепенно увеличивающаяся агрегация эритроцитов вызывает 3-фазную эволюцию сопротивления кровотоку (Yalcin et al., 2005). Во-первых, при повышении агрегации эритроцитов на 50–100% авторы наблюдали повышение сопротивления кровотоку. Затем увеличение агрегации эритроцитов на 100–150% приводило к снижению сопротивления кровотоку. Наконец, увеличение агрегации эритроцитов более чем на 150% вызвало повторное увеличение сопротивления кровотоку.В целом прогнозирование последствий повышенной агрегации эритроцитов in vivo представляется сложным. Однако клинические работы, выполненные для изучения агрегации при сердечно-сосудистых, метаболических или воспалительных заболеваниях, постоянно показывают, что люди с этими заболеваниями, как правило, имеют более высокий уровень агрегации эритроцитов, чем здоровые люди, и повышенная агрегация способствует развитию неблагоприятных исходов заболевания (Totsimon et al. , 2017; Биро и др., 2018; Брун и др., 2018; Ко и др., 2018; Лапумерули и др., 2019 г.; Piecuch и др., 2019; Шереметьев и др., 2019).
Серповидноклеточная анемия, реология крови и сосудистая дисфункция
Серповидноклеточная анемия (SCD) является наиболее распространенным генетическим заболеванием в мире. Серповидноклеточная анемия (SCA) на сегодняшний день является наиболее распространенной формой SCD, за ней следует гемоглобиновая SC болезнь (SC) (Piel et al., 2010). По оценкам, более 300 000 детей ежегодно рождаются с тяжелой наследственной гемоглобинопатией, более 80% этих детей рождаются в странах с низким или средним уровнем дохода, и примерно 220 000 детей страдают ВСС (Piel et al., 2010).
Серповидноклеточная анемия как гемореологическое заболевание
Серповидноклеточная анемия вызывается мутацией одного нуклеотида (аденин → тимин) в экзоне I гена β-глобина. Эта точечная мутация (rs334 T) приводит к образованию серповидного гемоглобина (HbS) из-за замены валина на глутаминовую кислоту в шестом положении цепи β-глобина. Гидрофобный остаток валина связывается с другими гидрофобными остатками, что вызывает агрегацию молекул HbS с образованием волокнистых осадков при деоксигенации гемоглобина.Это явление называется «полимеризацией HbS» и отвечает за характерное изменение формы эритроцитов, называемое «серповидным». Серповидные эритроциты ригидны и поэтому плохо проходят через микроциркуляторное русло, вызывая частые вазоокклюзионные эпизоды у пораженных пациентов. Кроме того, когда эритроциты теряют деформируемость, они становятся более хрупкими и склонными к гемолизу, что является первопричиной хронической гемолитической анемии при ВСС (Connes et al., 2014).
Хотя потеря деформируемости эритроцитов является фундаментальной характеристикой ВСС, у пациентов наблюдается различная степень жесткости эритроцитов, что может по-разному влиять на тяжесть заболевания и осложнения ВСС (Renoux et al., 2016). Новорожденные обычно имеют почти нормальную деформируемость эритроцитов, поскольку у них все еще сохраняется высокий процент фетального гемоглобина (HbF) (Renoux et al., 2016). Однако с возрастом HbF замещается HbS, в результате чего деформируемость эритроцитов снижается (Renoux et al., 2016). Терапия гидроксимочевиной (HU) может влиять на деформируемость эритроцитов, поскольку HU стимулирует синтез HbF, тем самым улучшая деформируемость эритроцитов, хотя значения деформируемости остаются ниже, чем у здоровых людей (Lemonne et al., 2015). У лиц, не получающих терапию ГУ, наличие или отсутствие альфа-талассемии также может модулировать деформируемость эритроцитов (Renoux et al., 2017), поскольку наследование альфа-талассемии приводит к снижению продукции HbS (Rees et al., 2010) и, таким образом, снизить полимеризацию HbS.
Жесткие, серповидно деформированные эритроциты могут вызывать прекапиллярную обструкцию и способствовать окклюзии сосудов (Rees et al., 2010). Кроме того, деформируемость эритроцитов еще больше снижается во время острых вазоокклюзионных событий.Однако пациенты (взрослые и дети старше 5 лет), имеющие наибольшую деформируемость эритроцитов в равновесном состоянии и не находящиеся на терапии ГУ, действительно имеют более высокий риск развития частых болевых вазоокклюзионных кризов, а также остеонекроза. (Lamarre et al., 2012; Lemonne et al., 2013; Renoux et al., 2017). Этот парадокс, по-видимому, связан с тем, что при SCA эритроциты с самой высокой деформируемостью также являются наиболее адгезивными, что может вызвать вазоокклюзию (Ballas et al., 1988). С другой стороны, люди, у которых в результате терапии ГУ улучшилась деформируемость эритроцитов, не имеют повышенного риска вазоокклюзионного криза, поскольку ГУ ингибирует адгезию эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов к сосудистой стенке с помощью нескольких механизмов (Bartolucci et al., 2010; Лоранс и др., 2011; Чаар и др., 2014; Паллис и др., 2014; Вергер и др., 2014). Агрегация эритроцитов обычно ниже у пациентов с СКА из-за низкого гематокрита и неспособности необратимых серповидноклеточных клеток образовывать агрегаты. Однако сообщается, что сформированные агрегаты эритроцитов гораздо более устойчивы, чем у здоровых людей, что может дополнительно изменить кровоток и тканевую перфузию на пре- и посткапиллярном уровнях (Tripette et al., 2009; Connes et al., 2014).
Больные серповидноклеточной анемией с высшей степенью хронического гемолиза (т.д., с наиболее тяжелой анемией) обычно характеризуются тяжелым и хроническим снижением деформируемости эритроцитов, а также наличием прочных агрегатов эритроцитов и, по-видимому, более склонны к развитию таких осложнений, как язвы нижних конечностей, приапизм и гломерулопатия. Bartolucci et al., 2012; Connes et al., 2013a; Lamarre et al., 2014). Напротив, пациенты с самой высокой деформируемостью эритроцитов, как правило, имеют менее выраженную анемию и повышенную вязкость крови, что может увеличить риск развития частых вазоокклюзионных осложнений (Nebor et al., 2011; Ламарр и др., 2012 г.; Шарло и др., 2016). Удивительно, но недавнее исследование не показало дальнейшего повышения вязкости крови во время острого болезненного вазоокклюзионного криза (Lapoumeroulie et al., 2019). Вместо этого авторы обнаружили снижение деформируемости эритроцитов в результате массивного серповидного образования эритроцитов (Ballas and Smith, 1992), а также повышение агрегации эритроцитов и устойчивости агрегатов эритроцитов, что, вероятно, ухудшит кровоток в микроциркуляторном русле (Lapoumeroulie et al. ., 2019).
Сосудистая функция не может компенсировать гемореологические изменения при SCA
Как обсуждалось ранее, недавние работы показали, что повышенная вязкость крови не вызывает систематического повышения сосудистого сопротивления у здоровых людей (Vazquez et al., 2010; Салазар Васкес и др., 2011). Вместо этого повышение вязкости крови может способствовать расширению сосудов и снижению сосудистого сопротивления за счет механизмов, зависящих от напряжения сдвига, которые увеличивают продукцию NO. Однако при наличии эндотелиальной/сосудистой дисфункции, например, при SCA (Kato et al., 2007; Ataga et al., 2016; Charlot et al., 2016), вазодилатация нарушается. Следовательно, повышение вязкости крови не может быть полностью компенсировано и может увеличить риск частых вазоокклюзионных кризов (Lemonne et al., 2012; Шарло и др., 2016).
Хронический гемолиз играет важную роль в развитии сосудистой дисфункции при ВСС. Как только гемоглобин попадает в плазму, он самоокисляется, образуя свободный гем, железо и активные формы кислорода, которые вызывают разобщение eNOS и снижают биодоступность NO (Kato et al., 2007). Эти изменения ограничивают расслабление гладкой мускулатуры сосудов и способствуют возникновению вазоокклюзионных кризов (Hebbel et al., 2004). Кроме того, гемолиз высвобождает в плазму аргиназу, содержащуюся в эритроцитах.Свободная аргиназа гидролизует аргинин, который является предшественником NO, до орнитина и мочевины, тем самым усугубляя снижение биодоступности NO (Kato et al., 2007).
Ксантиноксидаза (ХО) также способствует сосудистой дисфункции при ВСС. Аслан и др. (2001) продемонстрировали, что эпизоды внутрипеченочной гипоксии-реоксигенации, которые могут возникать при ВСС, индуцируют высвобождение КСО в плазме. Высвобожденный КСО может нарушать функцию сосудов, связываясь с просветными клетками сосудов. Это создает окислительную среду, которая приводит к поглощению NO через механизм, зависящий от свободных радикалов кислорода.Кроме того, Mockesch et al. (2017) недавно показали, что потеря функции микроциркуляторного русла у детей с ВСС в значительной степени связана как с нитротирозином, так и с маркерами системного окислительного стресса. Эти данные подтверждают важную роль окислительного стресса и удаления NO в развитии сосудистой дисфункции при ВСС.
Считается, что циркулирующие экстравезикулы, такие как микрочастицы (Camus et al., 2012, 2015) и экзосомы (Khalyfa et al., 2016), также играют роль в развитии сосудистой дисфункции при ВСС.Действительно, Камю и др. (2012) продемонстрировали, что инфузия in vitro -генерированных микрочастиц эритроцитов вызывала окклюзию сосудов почек у серповидноклеточных мышей. Кроме того, Халифа и соавт. (2016) продемонстрировали, что экзосомы, выделенные у пациентов с SCA с частыми вазоокклюзионными кризами, снижали проницаемость эндотелия и стимулировали экспрессию P-селектина на культивируемых эндотелиальных клетках. Экзосомы, выделенные от больных ВОС с частыми вазоокклюзионными кризами, также значительно повышали адгезию моноцитов к сосудистой стенке у мышей по сравнению с экзосомами, выделенными у больных ВОС с менее тяжелым фенотипом.В целом, эти работы предполагают, что методы лечения, направленные как на реологию крови, так и на функцию сосудов, могут быть полезны для уменьшения клинической тяжести пациентов с ВСС.
Упражнения и реология крови у здоровых людей и людей с SCA
Реология крови играет важную роль в регуляции тканевой перфузии в покое и при физической нагрузке. Например, эритроциты должны быть сильно деформируемыми, чтобы легко проходить через мелкие капилляры и транспортировать кислород к тканям (Parthasarathi and Lipowsky, 1999).Любые изменения реологических свойств эритроцитов во время физической нагрузки могут повлиять на вязкость крови (Baskurt and Meiselman, 2003), что, в свою очередь, может повлиять на кровоток и физическую работоспособность (Connes et al., 2013b; Waltz et al., 2015). Несколько исследователей сообщают о значительных корреляциях между текучестью крови и показателями физической подготовленности спортсменов, такими как время выносливости до утомления, аэробная работоспособность при 170 Вт (W170) и максимальное потребление кислорода (VO ₂ _max) (Ernst и другие., 1985; Брун и др., 1986, 1989, 1995).
Влияние интенсивной велотренировки на вязкость крови и ее детерминанты у здоровых людей
Большинство исследований, проведенных в 80-х и 90-х годах для изучения острого воздействия физических упражнений на реологию крови, были сосредоточены на езде на велосипеде, выполняемой умеренно тренированными людьми (Brun et al., 1998). В этих исследованиях сообщалось, что острая езда на велосипеде приводила к увеличению вязкости крови, измеренной при высокой скорости сдвига (т., 1998; Коннес и др., 2004a, 2013b; Рисунок 1). Это увеличение вязкости крови связывают с изменениями вязкости плазмы, гематокрита и реологических свойств эритроцитов (Brun et al., 1998).
Рисунок 1. Влияние различных видов упражнений на вязкость крови, измеренное при нескольких скоростях сдвига у одного и того же тренированного субъекта (максимальное потребление кислорода, VO ₂ max = 64 мл/кг/мин). Максимальные тесты на беговой дорожке и езде на велосипеде состояли из прогрессивных и максимальных упражнений, проводимых до VO ₂ max и выполняемых в лабораторных условиях (температура: 24°C).Бег на 10 км проводился на открытом воздухе (20°C) с максимальной интенсивностью, которую субъект мог пробежать. Действительно, испытуемый бежал со скоростью 77% от его максимальной аэробной скорости, определенной на беговой дорожке, и достиг частоты сердечных сокращений 92% от максимальной частоты сердечных сокращений. Испытуемый не пил воду во время каждого теста. Для трех тестов кровь брали сразу в конце упражнения и измеряли вязкость крови с помощью того же конического вискозиметра в течение 1 часа после взятия пробы.
Многочисленные исследования показали, что внезапный приступ максимальных или субмаксимальных циклических упражнений может привести к увеличению вязкости плазмы на 10–12% по сравнению со значениями в состоянии покоя (Ernst, 1985; Ernst et al., 1991б; Брун и др., 1994b, 1998; Буикс и др., 1998 г.; Коннес и др., 2004b). Это увеличение объясняется повышением содержания белков плазмы, таких как фибриноген, α1-глобулины, α2-глобулины, β-глобулины и γ-глобулины, во время физической нагрузки (Nosadova, 1977; Convertino et al., 1981; Vandewalle et al. ., 1988; Вуд и др., 1991).
Несколько исследований также показали, что интенсивная езда на велосипеде может привести к повышению гематокрита на 10–12% (т. е. на 3–4 единицы) по сравнению со значениями до тренировки (Brun et al., 1994б; Буикс и др., 1998 г.; Коннес и др., 2004а). Хорошо описано влияние повышенного гематокрита на вязкость крови при высоких скоростях сдвига (Cokelet and Meiselman, 2007). Увеличение гематокрита на 1 единицу может привести к увеличению вязкости крови на 4%. Это повышение гематокрита объясняется несколькими механизмами, такими как перемещение жидкости между внутри- и внесосудистыми пространствами (Sjogaard et al., 1985; Ploutz-Snyder et al., 1995), обезвоживанием (Nosadova, 1977; Stephenson and Kolka, 1988) высвобождение секвестрированных эритроцитов из селезенки (Isbister, 1997) и удержание воды в мышцах (Ploutz-Snyder et al., 1995).
Острые велотренировки также могут модулировать деформируемость эритроцитов. Несколько авторов сообщают об уменьшении деформируемости эритроцитов во время и сразу после физической нагрузки (Reinhart et al., 1983; Galea and Davidson, 1985; Gueguen-Duchesne et al., 1987; Brun et al., 1993, 1994a; Oostenbrug et al. , 1997; Ялчин и др., 2000, 2003). Это снижение может быть следствием выработки молочной кислоты и активных форм кислорода во время физических упражнений (Connes et al., 2013b). Накопление ионов лактата и снижение рН будет способствовать дегидратации эритроцитов за счет активации нескольких катионных каналов эритроцитов, что приведет к усадке эритроцитов и снижению их деформируемости (Van Beaumont et al., 1981; Липовак и др., 1985; Смит и др., 1997; Коннес и др., 2004c). Более того, несколько групп предположили, что окислительный стресс также может играть роль в снижении деформируемости эритроцитов за счет окисления липидных и белковых компонентов мембраны (Senturk et al., 2005a, b; Connes et al., 2013b). Однако величина изменения деформируемости эритроцитов, которое происходит во время упражнений, по-видимому, зависит от тренировочного статуса и физической подготовки испытуемых. Например, Senturk et al. (2005a) сообщили, что короткий, прогрессивный, максимальный циклический нагрузочный тест способствовал окислительному стрессу как у малоподвижных, так и у хорошо тренированных субъектов, но они наблюдали только снижение деформируемости эритроцитов и увеличение хрупкости эритроцитов у малоподвижных людей.
Очень мало исследований наблюдали агрегацию эритроцитов во время велотренировок, и результаты этих исследований очень разнородны (Connes et al., 2013b). Ялчин и др. (2003) обнаружили, что агрегация эритроцитов уменьшилась после нагрузочного теста Вингейта. Напротив, Ernst et al. (1991b) наблюдали кратковременное увеличение агрегации эритроцитов по сравнению с показателями до тренировки после 1 часа педалирования при частоте сердечных сокращений 150 ударов в минуту ^–1. Затем агрегация эритроцитов возвращалась к исходному уровню в течение 2 часов после циклического теста.Варле-Мари и др. (2003) и Connes et al. (2007) не обнаружили изменений в агрегации эритроцитов в ответ на субмаксимальные/максимальные циклические упражнения. Наблюдаемые расхождения не очень хорошо изучены и могут быть связаны с (1) типом выполняемых упражнений (короткие или продолжительные упражнения), (2) временем измерения во время упражнений (т. е. сразу в конце упражнения или через несколько минут после него). , (3) временная задержка для измерения после отбора проб и (4) процедура, используемая для измерения агрегации эритроцитов (адекватная оксигенация и скорректированный гематокрит до измерения или нет).
В целом эти изменения приводят к повышению вязкости крови при острой велотренировке. Обычно считается, что значительное повышение вязкости крови вредно для сердечно-сосудистой системы (Brun et al., 1998; Connes et al., 2013b). Однако Коннес и соавт. (2012) сообщили о положительной корреляции между величиной изменения вязкости крови и величине изменения конечных стабильных продуктов NO и об отрицательной корреляции между величиной изменения вязкости крови и величиной изменения сосудистого сопротивления.Эти данные свидетельствуют о том, что увеличение вязкости крови во время физических упражнений может быть способом стимуляции эндотелий-зависимой продукции NO посредством механизмов, связанных со сдвиговым напряжением. У здоровых людей это может привести к компенсаторной вазодилатации, тем самым предотвращая значительное увеличение сосудистого сопротивления.
Острые беговые упражнения, вязкость крови и ее детерминанты у здоровых людей
Удивительно, но в отличие от велосипедных упражнений беговые упражнения, такие как марафон или гонка на 10 км, не вызывают повышения вязкости крови (Neuhaus et al., 1992; Трипетт и др., 2011; Рисунок 1). Основная причина заключается в том, что гематокрит и вязкость плазмы обычно остаются очень стабильными во время такого рода усилий, несмотря на обезвоживание (Galea and Davidson, 1985; Neuhaus et al., 1992; Neuhaus and Gaehtgens, 1994). Было высказано предположение, что отсутствие изменений гематокрита можно объяснить повторным гемолизом эритроцитов при ударе стопой во время бега (Neuhaus et al., 1992; Neuhaus and Gaehtgens, 1994; Tripette et al., 2011; Connes et al., 2013b). . Однако недавнее исследование, в котором хорошо тренированные испытуемые выполняли прогрессивный и максимальный тест на беговой дорожке, не выявило каких-либо признаков повреждения эритроцитов или эриптоза (Nader et al., 2018). Однако во время ультрамарафонских соревнований картина может немного отличаться. Например, Робах и др. (2014) сообщили о повышенном гемолизе и большом увеличении объема плазмы сразу после 166-километрового горного сверхвыносливого марафона с набором/сбросом высоты на 9500 м. Влияние этих изменений на реологию крови не изучалось, и для решения этого вопроса необходимы дальнейшие исследования.
Удивительно, но Nader et al. (2018) обнаружили незначительное, но достоверное увеличение деформируемости эритроцитов в ответ на короткий и максимальный нагрузочный тест.Действительно, несмотря на повышение гематокрита, вязкость крови оставалась неизменной (и имела тенденцию к снижению), что и наблюдалось в предыдущих исследованиях (Neuhaus, Gaehtgens, 1994; Tripette et al., 2011). Полученные данные свидетельствуют о том, что небольшое увеличение деформируемости эритроцитов могло компенсировать повышение гематокрита, наблюдаемое во время коротких беговых упражнений, что приводило к отсутствию изменения вязкости крови. Влияние сверхбыстрых событий на деформируемость эритроцитов неизвестно. Несколько других групп обнаружили небольшое увеличение деформируемости эритроцитов во время бега (Suhr et al., 2012) и езда на велосипеде (Connes et al., 2009). Хотя точные причины этих результатов неизвестны, было высказано предположение, что повышенная продукция NO во время упражнений может увеличить деформируемость эритроцитов. Одной из первых работ, в которой предполагалось, что NO может влиять на деформируемость эритроцитов, было исследование Starzyk et al. (1997), которые продемонстрировали, что внутривенное введение L-NAME (ингибитора eNOS) крысам вызывало снижение деформируемости эритроцитов. Кроме того, Bor-Kucukatay et al. (2003) сообщили, что некоторые ингибиторы eNOS также снижают деформируемость эритроцитов, предполагая, что базальное высвобождение NO активно поддерживает деформируемость эритроцитов.В то время как внеклеточные источники NO могут влиять на деформируемость эритроцитов, в нескольких работах предполагается, что эндогенный синтез NO в эритроцитах также может модулировать деформируемость эритроцитов (Kleinbongard et al., 2006). Зур и др. (2012) продемонстрировали, что интенсивное беговое упражнение индуцирует активацию напряжения сдвига NOS эритроцитов (увеличение фосфорилирования NOS эритроцитов по Ser1177) через путь PI3-киназы/Akt киназы, что приводит к увеличению продукции NO эритроцитами, что имеет решающее значение для поддержания деформируемости эритроцитов. во время упражнений. Грау и др.(2013) расширили эти результаты, показав, что активация NOS в эритроцитах фармакологическим лечением (инсулином) увеличивает содержание NO в эритроцитах и улучшает деформируемость эритроцитов за счет прямого S-нитрозилирования белков цитоскелета, скорее всего, α- и β-спектров. Напротив, применение ингибиторов NOS эритроцитов [вортманнин или L-N5-(1-иминоэтил)-орнитин] приводило к снижению фосфорилирования NOS Ser1177 эритроцитов, содержания NO, S-нитрозилирования белка цитоскелета и деформируемости эритроцитов.
Влияние физиологических изменений во время интенсивной физической нагрузки на вязкость крови
Как обсуждалось выше, интенсивная езда на велосипеде приведет к повышению вязкости крови, в то время как беговые упражнения будут характеризоваться отсутствием изменений вязкости крови по сравнению со значениями до тренировки.Хотя методологические аспекты могут частично объяснить некоторые из этих различий, такие как использование различных вискозиметров (вискозиметр с конусной пластиной, вискозиметр Куэтта, капиллярный вискозиметр и т. д.) или использование различных скоростей сдвига (вязкость с низкой, средней и высокой скоростью сдвига). зависят от различных реологических параметров эритроцитов), картина, вероятно, немного сложнее. Во время физических упражнений происходят некоторые физиологические изменения, которые могут влиять на вязкость крови.
Чтобы избежать сильного обезвоживания во время тренировки, спортсмены обычно пьют воду или напитки, богатые углеводами.Однако большая часть исследований, выполненных в области реологии крови, проводилась в лабораторных условиях, когда вода не допускается во время различных нагрузочных проб и потеря воды не может быть компенсирована приемом воды. Трипетт и др. (2010) и Diaw et al. (2014) ранее исследовали влияние гидратации без ограничения и обезвоживания на вязкость крови во время длительных субмаксимальных упражнений и футбольного матча соответственно. Были включены здоровые люди и субъекты, несущие признак серповидно-клеточной анемии.В то время как гидратация во время упражнений была способна снизить вязкость крови ниже уровня до тренировки у носителей признака серповидно-клеточной анемии, вязкость крови увеличивалась одинаково у здоровых людей как в условиях «гидратации», так и в условиях «водной депривации». Уровень обезвоживания в этих исследованиях составлял около 1,5–2%, что не является очень серьезным. Сообщество бегунов проявляет растущий интерес к участию в очень длительных гонках (> 100 км), иногда проводимых на большой высоте. Влияние окружающей среды и более высокой скорости обезвоживания на вязкость крови неизвестно, и необходимы дальнейшие исследования.
Физическая нагрузка сопровождается повышением сердечного выброса и кровотока, что приводит к увеличению показателей скорости сдвига в сосудистой системе. Например, сообщалось, что скорость сдвига в бедренной артерии увеличивается с 60 с ^–1 в покое до 200–250 с ^–1 во время нагрузки (Gonzales et al., 2009). Кровь представляет собой жидкость, разжижающуюся при сдвиге, а это означает, что ее вязкость уменьшается при увеличении скорости сдвига. Коннес и др. (2013b) показали, что 15-минутная езда на велосипеде с субмаксимальной интенсивностью увеличивает вязкость крови, измеренную за 90 с, ^–1.Однако, когда вязкость крови, взятой в конце тренировки, была измерена при 225 с ^–1 (что отражает скорость сдвига, достигнутую во время нагрузки), среднее значение было почти идентичным вязкости крови, взятой до тренировки и измерено через 90 с ^–1 . Действительно, эффекты гемоконцентрации, повышенной вязкости плазмы, снижения деформируемости эритроцитов и повышенной агрегации эритроцитов на вязкость крови во время физической нагрузки могут быть уравновешены эффектами увеличения скорости сдвига (Connes et al., 2013б). Тем не менее, небольшие оставшиеся изменения вязкости крови, наблюдаемые во время упражнений, по-прежнему коррелировали с величиной изменений концентрации конечных продуктов NO, что свидетельствует о том, что вязкость крови играет роль в стимулировании продукции NO во время упражнений (Connes et al., 2013b).
Температура тела повышается во время физической нагрузки, и хорошо известно, что вязкость крови также зависит от температуры (Baskurt et al., 2009). Недавнее элегантное исследование показало, что если при измерении вязкости крови принять во внимание изменения температуры, происходящие во время физической нагрузки, нет никакой разницы между значениями до и после тренировки (Buono et al., 2016). Показано, что незначительная физиологическая гипертермия увеличивает деформируемость эритроцитов, что компенсирует повышение гематокрита и приводит к отсутствию изменения вязкости крови. Авторы подсчитали, что комбинированные эффекты увеличения скорости сдвига и гипертермии во время упражнений могут снизить вязкость крови на 31% по сравнению с уровнями до тренировки, несмотря на гемоконцентрацию, вызванную нагрузкой (Buono et al., 2016). Эти результаты ясно показывают, что исследования в области гемореологии физической нагрузки должны учитывать влияние различных физиологических факторов для лучшей интерпретации роли вязкости крови в сердечно-сосудистой адаптации и физической подготовке.
Долгосрочное влияние упражнений на реологию крови у здоровых людей
Постоянные упражнения (упражнения на выносливость или сопротивление) обычно снижают вязкость крови (Brun et al., 1998; Romain et al., 2011; Kilic-Toprak et al., 2012). Одна из причин этого изменения заключается в том, что объем плазмы увеличивается через несколько часов или дней после однократной тренировки (Fellmann, 1992; Brun et al., 1998), что приводит к «аутогемодилюции» (Ernst, 1987; Ernst et al., 1991а). Повторяющиеся упражнения в последующие дни приводят к хронической «аутогемодилюции», что приводит к низкому исходному гематокриту и низкому исходному показателю вязкости (Ernst, 1987; Brun et al., 1998; Килич-Топрак и др., 2012). Величина расширения объема плазмы колеблется от 9 до 25%, что соответствует дополнительным 300-700 мл плазмы. Было показано, что чем больше уменьшается объем плазмы во время физической нагрузки, тем больше последующее увеличение объема плазмы (Fellmann, 1992). Количество воды, потребляемой во время и после тренировки, а также несколько гормонов, регулирующих жидкость (альдостерон, вазопрессин и предсердный натрийуретический фактор), и уровень белков плазмы влияют на степень увеличения объема плазмы после тренировки.Увеличение объема плазмы отвечает за снижение вязкости плазмы, что способствует снижению вязкости крови (Ernst, 1987).
Упражнения также вызывают реологическую адаптацию эритроцитов (Brun et al., 2010; Kilic-Toprak et al., 2012). Ernst (1987) сообщил о повышенной деформируемости эритроцитов у спортсменов по сравнению с людьми, ведущими малоподвижный образ жизни, что позднее было подтверждено Smith et al. (1999). Трехмесячное лонгитюдное исследование исходно нетренированных здоровых добровольцев, проводивших регулярные тренировки, также показало снижение вязкости крови и повышение деформируемости эритроцитов (Ernst, 1987).Было проведено несколько исследований, чтобы определить, почему деформируемость эритроцитов улучшается у здоровых людей после хронических упражнений. Однако Смит и соавт. (1999) и Tomschi et al. (2018) обнаружили более высокую долю молодых деформируемых эритроцитов у спортсменов, чем у нетренированных людей. Предполагается, что гемореологические преимущества, вызванные регулярными физическими упражнениями, способствуют улучшению здоровья сердечно-сосудистой системы, вызванному программами тренировок у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями (Sandor et al., 2014).
Острые и хронические эффекты упражнений при ВСС
Метаболические изменения, происходящие во время физических упражнений, могут способствовать полимеризации HbS, серповидности эритроцитов, окислительному стрессу и воспалению. По этой причине врачи, как правило, неохотно поощряют физическую активность лиц с ВСС (Connes, 2010; Waltz and Connes, 2014; Chirico et al., 2016; Martin et al., 2018). Однако, поскольку было показано, что регулярная физическая активность приносит пользу для здоровья при различных хронических заболеваниях, несколько групп начали изучать эффекты острых и хронических упражнений у людей и мышей с ВСС.
Пациенты с серповидноклеточной анемией имеют более низкую аэробную физическую форму по сравнению с населением в целом (Connes et al., 2011). Вероятно, это связано с сочетанием нескольких факторов, включая хроническую анемию, снижение мышечной массы и силы, аномальную функцию сердца, нарушения газообмена, ограничения механической вентиляции и поражение периферических сосудов (Callahan et al., 2002; Dougherty et al., 2011). ; Liem et al., 2015; Badawy et al., 2018; Merlet et al., 2019). В недавнем исследовании сообщалось об отрицательной связи между наклоном эффективности поглощения кислорода (показатель аэробной физической подготовки) и гематокритом, деформируемостью эритроцитов и совокупной силой эритроцитов у взрослых с ВСС (Charlot et al., 2015). Эти биологические параметры также были связаны со способностью восстанавливаться после короткой субмаксимальной нагрузки (Charlot et al., 2015). В другом исследовании Waltz et al. (2013) показали, что высокий уровень анемии, низкий уровень фетального гемоглобина и низкая деформируемость эритроцитов были независимыми предикторами низкой эффективности теста 6-минутной ходьбы.
Реологические нарушения крови играют ключевую роль в патофизиологии ВОС. По этой причине в нескольких работах изучалось влияние интенсивных упражнений на различные биологические параметры, чтобы определить, какие упражнения можно считать полностью безопасными для людей с ВСС.В исследовании, проведенном в Кот-д’Ивуаре, 17 пациентов с ВСС выполняли 20-минутные умеренные упражнения (45 Вт) с забором крови до и в конце упражнений (Balayssac-Siransy et al., 2011; Faes et al., 2014). Несмотря на увеличение процента плотных эритроцитов в конце нагрузки, вязкость крови и растворимые формы Р- и Е-селектина оставались неизменными по сравнению с уровнем до тренировки (Balayssac-Siransy et al., 2011; Faes et al. ., 2014). Небольшое увеличение растворимых в плазме форм VCAM-1 и ICAM-1 было отмечено в конце тренировки у пациентов с ВСС, что свидетельствует о легкой активации эндотелия (Faes et al., 2014). С другой стороны, другое исследование Liem et al. (2015) сообщили о более высоких концентрациях растворимого VCAM-1 в плазме пациентов с СКА в состоянии покоя по сравнению с контрольной группой, но тесты с прогрессивной и максимальной нагрузкой не вызывали дальнейшего повышения VCAM-1. Дополнительное исследование Waltz et al. (2012) оценивали реологические параметры крови у пациентов с ВСС после коротких (10–12 мин) прогрессивных субмаксимальных циклических упражнений, проводимых до достижения первого дыхательного порога. Упражнение не вызывало изменений гематокрита, количества лейкоцитов, вязкости крови, деформируемости эритроцитов или агрегации эритроцитов.Кроме того, прочность агрегатов эритроцитов снижалась через 2 и 3 дня после нагрузки. Этот отсроченный эффект физической нагрузки на совокупную силу эритроцитов может быть полезен с клинической точки зрения, поскольку этот параметр связан с риском острого грудного синдрома (Lamarre et al., 2012) и повышается во время вазоокклюзионных кризов (Lapoumeroulie et al. ., 2019). Грау и др. (2019) недавно подтвердили, что короткие прогрессивные и субмаксимальные циклические упражнения не оказали вредного влияния на деформируемость эритроцитов, и показали, что такого рода усилия не усугубляют гемолиз.Наконец, Барбо и соавт. (2001) ранее сообщали, что повторение 30-минутных умеренных упражнений в течение трех дней подряд увеличивает концентрацию NO в плазме у пациентов с ВСС. Это можно рассматривать как положительный эффект, поскольку биодоступность NO снижается при SCA (Kato et al., 2007). Важно отметить, что ни в одном из этих исследований не сообщалось о каких-либо клинических осложнениях сразу или через несколько дней после тренировки (Barbeau et al., 2001; Balayssac-Siransy et al., 2011; Waltz et al., 2012; Faes et al., 2014; Грау и др., 2019). В целом, результаты этих исследований показывают, что упражнения легкой и средней интенсивности, вероятно, безопасны при ВСС, но следует избегать более длительных или высокоинтенсивных упражнений или рекомендовать их только в каждом конкретном случае (Martin et al., 2018). Тем не менее, у некоторых пациентов может наблюдаться умеренная или тяжелая десатурация гемоглобина даже во время низкоинтенсивных или субмаксимальных упражнений, таких как тест с 6-минутной ходьбой (Waltz et al., 2013). Десатурация гемоглобина может способствовать серповидности эритроцитов в условиях длительного гипоксического стресса.Таким образом, пациенты с ВСС всегда должны проходить скрининг на десатурацию гемоглобина во время тестов с физической нагрузкой, чтобы определить, подвержен ли человек риску гипоксемии, вызванной физической нагрузкой, при субмаксимальных усилиях.
Накапливающиеся данные, свидетельствующие о том, что интенсивные физические нагрузки могут быть безопасными для пациентов с ВСС, побудили несколько групп протестировать эффекты регулярных упражнений на мышах и людях с ВОС. Исследования, проведенные на серповидных мышах с САР, показали, что 8 недель произвольного бега на колесе снижали вязкость крови (Faes et al., 2015), ограниченный системный окислительный стресс (Charrin et al., 2015) и снижение активации легочного эндотелия в ответ на стимул гипоксической реоксигенации (Aufradet et al., 2014). Дополнительное исследование, проведенное Charrin et al. (2018) оценили влияние 8-недельных аэробных тренировок (1 час в день, 5 дней в неделю) на модели мышей с более тяжелой ВСС (мыши Townes). Постоянные физические упражнения снижали несколько маркеров системного воспаления, в том числе количество лейкоцитов, соотношение цитокинов Th2/Th3 в плазме и уровень интерлейкина-1β, а также уменьшали возникновение спленомегалии.Кроме того, два других исследования также показали, что тренировка на выносливость улучшила мышечную функцию у мышей Townes SCA (Chatel et al., 2018; Gouraud et al., 2019).
В настоящее время было проведено всего несколько исследований по оценке хронических упражнений у людей с ВСС. Омванге и др. (2017) недавно сообщили, что 90% детей с ВСС занимаются физкультурой, а 48% занимаются спортом. Эти данные показывают, что дети с ВСС выполняют физическую активность умеренной или высокой интенсивности в течение короткого времени.Та же исследовательская группа также назначила три домашних упражнения в неделю в течение 12 недель 13 детям с ВСС. Результаты показали, что 77% испытуемых выполнили 89% предписанных занятий без каких-либо побочных эффектов, связанных с физическими упражнениями. Эти результаты показывают, что регулярные умеренные физические нагрузки безопасны и выполнимы для детей с ВСС. В дополнительном исследовании Gellen et al. (2018), взрослые с ВОС выполняли упражнения по 45 минут три раза в неделю в течение 8 недель. За период исследования не было зарегистрировано нежелательных явлений, что подтверждает, что регулярная физическая активность может быть безопасной для людей с ВСС.Более того, выходная мощность испытуемых с SCA, измеренная при 4 ммоль/л лактата в крови, значительно увеличилась после 8-недельного тренировочного периода, что указывает на улучшение физической формы. В настоящее время не проводилось исследований на людях, чтобы определить, могут ли хронические упражнения модулировать биологические параметры (например, реологию крови, гематологию, воспаление, окислительный стресс), которые вызывают различные острые осложнения, с которыми сталкиваются люди с ВСС. Однако имеющиеся в настоящее время данные свидетельствуют о том, что тренировки на выносливость средней интенсивности потенциально могут быть использованы в качестве полезной терапевтической стратегии для пациентов с ВСС (Gellen et al., 2018).
Заключение
Таким образом, вязкость цельной крови является физиологическим параметром, который следует учитывать при изучении сосудистого сопротивления у здоровых людей или у пациентов с различными заболеваниями. Вязкость плазмы, гематокрит, деформируемость эритроцитов и агрегация эритроцитов — все это факторы, влияющие на вязкость крови. Изменения любого из этих факторов могут изменить сопротивление кровотоку в сосудистой сети и изменить тканевую перфузию. У здоровых людей сосудистая система может адаптироваться к повышению вязкости крови, поскольку повышенное напряжение сдвига приводит к эндотелий-зависимой продукции NO.Однако у лиц с сосудистой дисфункцией сосуды не способны эффективно расширять сосуды. Следовательно, повышенная вязкость крови может увеличить сосудистое сопротивление.
Тканевая перфузия играет ключевую роль во время упражнений, а упражнения могут модулировать вязкость крови и реологию эритроцитов. Эффекты интенсивной физической нагрузки у здоровых людей зависят от модальности упражнений, интенсивности, продолжительности и физической подготовки субъектов. Большинство исследований показали, что интенсивная езда на велосипеде увеличивает вязкость крови за счет снижения деформируемости эритроцитов и увеличения гематокрита и вязкости плазмы (рис. 2).В отличие от этого предполагается, что быстрые беговые упражнения не вызывают каких-либо изменений вязкости крови из-за неизменного гематокрита (рис. 2). Кроме того, было показано, что хронические физические упражнения снижают вязкость крови за счет повышения деформируемости эритроцитов и снижения гематокрита из-за хронической аутогемодилюции (рис. 2).
Рисунок 2. Острое (A) и хроническое (B) влияние физической нагрузки на реологию крови (вязкость крови, вязкость плазмы, гематокрит, деформируемость и агрегацию эритроцитов) у здоровых людей и пациентов с серповидно-клеточной анемией анемия., ↑, ↓; = без изменений; ?, неизвестный.
Серповидноклеточная анемия — наследственное заболевание, вызывающее патологические изменения реологических свойств крови, которые в конечном итоге способствуют развитию сосудистой дисфункции и осложнений заболевания. Несколько исследований показали, что интенсивные физические нагрузки легкой и средней интенсивности хорошо переносятся людьми с ВСС (рис. 2). Кроме того, было показано, что хронические упражнения вызывают положительную гемореологическую адаптацию, которая может играть роль в положительном эффекте программ тренировок у пациентов с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями (рис. 2).Поэтому необходимо провести дополнительные исследования, чтобы определить, могут ли хронические физические упражнения улучшить реологические показатели крови у лиц с ВСС и уменьшить тяжесть осложнений заболевания.
Вклад авторов
EN, SS и PC написали первую версию рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Каталожные номера
Аслан, М., Райан, Т.М., Адлер, Б., Таунс, Т.М., Паркс, Д.А., Томпсон, Дж.А., и соавт. (2001). Кислород-радикальное ингибирование зависимой от оксида азота сосудистой функции при серповидно-клеточной анемии. Проц. Натл. акад. науч. США 98, 15215–15220. doi: 10.1073/pnas.2212
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Атага, К.И., Деребайл, В.К., Коги, М., Эльшериф, Л., Шен, Дж.Х., Джонс, С.К., и соавт. (2016).Альбуминурия связана с эндотелиальной дисфункцией и повышенным уровнем эндотелина-1 в плазме при серповидноклеточной анемии. PLoS One 11:e0162652. doi: 10.1371/journal.pone.0162652
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Aufradet, E., Douillard, A., Charrin, E., Romdhani, A., De Souza, G., Bessaad, A., et al. (2014). Физическая активность ограничивает активацию легочного эндотелия у серповидноклеточных мышей с SAD. Кровь 123, 2745–2747. дои: 10.1182/кровь-2013-10-534982
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Бадави, С.М., Пейн, А.Б., Родегир, М.Дж., и Лием, Р.И. (2018). Толерантность к физическим нагрузкам и клинические исходы у взрослых наблюдались в совместном исследовании серповидноклеточной анемии (CSSCD). евро. Дж. Гематол. 101, 532–541. doi: 10.1111/ejh.13140
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Balayssac-Siransy, E., Connes, P., Tuo, N., Danho, C., Diaw, M., Sanogo, I., et al. (2011). Легкие гемореологические изменения, вызванные умеренными упражнениями на выносливость у пациентов с серповидноклеточной анемией. Бр. Дж. Гематол. 154, 398–407. doi: 10.1111/j.1365-2141.2011.08728.x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Баллас С.К., Ларнер Дж., Смит Э.Д., Суррей С., Шварц Э. и Раппапорт Э.Ф. (1988). Реологические предикторы тяжести болевого серповидно-клеточного криза. Кровь 72, 1216–1223.
Реферат PubMed | Академия Google
Баллас, С.К., и Смит, Э.Д. (1992). Изменения эритроцитов во время развития болезненного кризиса серповидноклеточной анемии. Кровь 79, 2154–2163.
Реферат PubMed | Академия Google
Barbeau, P., Woods, K.F., Ramsey, L.T., Litaker, M.S., Pollock, D.M., Pollock, J.S., et al. (2001). Физические нагрузки при серповидноклеточной анемии: влияние на воспалительные и вазоактивные медиаторы. Эндотелий 8, 147–155.
Реферат PubMed | Академия Google
Бартолуччи, П., Бругнара, К., Тейшейра-Пинто, А., Писсар, С., Морадхани, К., Жуо, Х., и соавт. (2012). Плотность эритроцитов при серповидно-клеточных синдромах связана со специфическими клиническими проявлениями и гемолизом. Кровь 120, 3136–3141. дои: 10.1182/кровь-2012-04-424184
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Bartolucci, P., Chaar, V., Picot, J., Bachir, D., Habibi, A., Fauroux, C., et al. (2010). Снижение адгезии серповидных эритроцитов к ламинину под действием гидроксимочевины связано с ингибированием фосфорилирования белка Lu/BCAM. Кровь 116, 2152–2159. дои: 10.1182/кровь-2009-12-257444
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Баскурт, О.и Майзельман, Х. Дж. (2007). «Гемореология in vivo», в Handbook of Hemorheology and Hemodynamics , eds O.K. Baskurt, MR Hardeman, MW Rampling и HJ Meiselman, (Amsterdam: IOS Press), 322–338.
Академия Google
Baskurt, O.K., Boynard, M., Cokelet, G.C., Connes, P., Cooke, B.M., Forconi, S., et al. (2009). Новые рекомендации по гемореологическим лабораторным методам. клин. гемореол. Микроциркуляр 42, 75–97. doi: 10.3233/CH-2009-1202
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Баскурт, О.К., Ялчин, О., и Майзельман, Х. Дж. (2004). Гемореология и механизмы сосудистой регуляции. клин. гемореол. Микроциркуляр 30, 169–178.
Реферат PubMed | Академия Google
Биро, К., Сандор, Б., Ковач, Д., Чизар, Б., Векаси, Дж., Тоцимон, К., и соавт. (2018). Ишемия нижних конечностей и микрореологические изменения у больных диабетической ретинопатией. клин. гемореол. Микроциркуляр. 69, 23–35. doi: 10.3233/CH-189103
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Бор-Кучукатай, М., Wenby, R.B., Meiselman, HJ, and Baskurt, O.K. (2003). Влияние оксида азота на деформируемость эритроцитов. утра. Дж. Физиол. Цирк Сердца. Физиол. 284, h2577–h2584. doi: 10.1152/ajpheart.00665.2002
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Bouix, D., Peyreigne, C., Raynaud, E., Monnier, J.F., Micallef, J.P., and Brun, J.F. (1998). Взаимосвязь между составом тела, гемореологией и физическими упражнениями у регбистов. клин.гемореол. Микроциркуляр 19, 245–254.
Реферат PubMed | Академия Google
Брун, Дж. Ф., Крики, К., и Орсетти, А. (1986). Гемореологические параметры и физическое телосложение. Спорт Мед. Акта. 12, 56–60.
Академия Google
Брун, Дж. Ф., Фонс, К., Суппаро, К., Маллард, К., и Орсетти, А. (1993). Может ли вызванное физической нагрузкой повышение вязкости крови при высокой скорости сдвига полностью объясняться изменениями гематокрита и вязкости плазмы? клин.гемореол. 13, 187–199.
Академия Google
Брун, Дж. Ф., Халед, С., Рейно, Э., Буикс, Д., Микаллеф, Дж. П., и Орсетти, А. (1998). Трехфазное влияние упражнений на реологию крови: какое отношение к физиологии и патофизиологии? клин. гемореол. Микроциркуляр. 19, 89–104.
Реферат PubMed | Академия Google
Брун, Дж. Ф., Микаллеф, Дж. П., и Орсетти, А. (1994a). Гемореологические эффекты легкой длительной физической нагрузки. клин.гемореол. 14, 807–818.
Академия Google
Брун, Дж. Ф., Суппаро, К., Кряква, К., и Орсетти, А. (1994b). Низкие значения вязкости крови в покое и агрегации эритроцитов связаны с меньшим повышением уровня лактата в крови при субмаксимальных нагрузках. клин. гемореол. 14, 105–116.
Академия Google
Брун, Дж. Ф., Секкат, М., Лагуэйт, К., Феду, К., и Орсетти, А. (1989). Взаимосвязь между физической подготовкой и вязкостью крови у нетренированных нормальных низкорослых детей. клин. гемореол. 9, 953–963.
Академия Google
Брун, Дж. Ф., Суппаро, К., Рама, Д., Бенезис, К., и Орсетти, А. (1995). Максимальное потребление кислорода и лактатный порог во время физической нагрузки связаны с вязкостью крови и агрегацией эритроцитов у профессиональных футболистов. клин. гемореол. 15, 201–212.
Академия Google
Брюн, Дж. Ф., Варле-Мари, Э., Конн, П., и Алулу, И. (2010). Гемореологические изменения, связанные с тренировками и перетренировками. Биореология 47, 95–115. doi: 10.3233/БИР-2010-0563
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Брюн, Дж. Ф., Варле-Мари, Э., Ришу, М., Мерсье, Дж., и Рейно де Моверже, Э. (2018). Реология крови как зеркало эндокринного и метаболического гомеостаза в норме и при патологии1. клин. гемореол. Микроциркуляр 69, 239–265. doi: 10.3233/CH-189124
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Буоно, М.Дж., Криппс Т., Колкхорст Ф.В., Уильямс А.Т. и Кабралес П. (2016). Повышение температуры тела уравновешивает влияние гемоконцентрации на вязкость крови при длительных физических нагрузках в жару. Экспл. Физиол. 101, 332–342. дои: 10.1113/EP085504
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Каллахан, Л. А., Вудс, К. Ф., Менса, Г. А., Рэмси, Л. Т., Барбо, П., и Гутин, Б. (2002). Сердечно-легочные реакции на физическую нагрузку у женщин с серповидноклеточной анемией. утра. Дж. Дыхание. крит. Уход Мед. 165, 1309–1316. doi: 10.1164/rccm.2002036
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Камю, С. М., Де Мораес, Дж. А., Боннин, П., Аббяд, П., Ле Жен, С., Лайоннет, Ф., и др. (2015). Циркулирующие микрочастицы клеточной мембраны переносят гем в эндотелиальные клетки и вызывают закупорку сосудов при серповидно-клеточной анемии. Кровь 125, 3805–3814. doi: 10.1182/blood-2014-07-589283
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Камю, С.M., Gausseres, B., Bonnin, P., Loufrani, L., Grimaud, L., Charue, D., et al. (2012). Микрочастицы эритроцитов могут вызывать закупорку сосудов почек в мышиной модели серповидно-клеточной анемии. Кровь 120, 5050–5058. дои: 10.1182/кровь-2012-02-413138
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Чаар, В., Лоранс, С., Лапумерули, К., Коше, С., Де Грандис, М., Колин, Ю., и другие. (2014). Гидроксикарбамид снижает адгезию серповидных ретикулоцитов к покоящемуся эндотелию путем ингибирования молекул адгезии эндотелиальных лютерановых/базальных клеток (Lu/BCAM) посредством активации фосфодиэстеразы 4A. Дж. Биол. хим. 289, 11512–11521. doi: 10.1074/jbc.M113.506121
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Шарло, К., Романа, М., Мёкеш, Б., Джумет, С., Вальс, X., Дивиаль-Думдо, Л., и другие. (2016). Какая часть баланса определяет частоту вазоокклюзионных кризов у детей с серповидно-клеточной анемией: вязкость крови или микроваскулярная дисфункция? Клетки крови Мол. Дис. 56, 41–45. doi: 10.1016/j.bcmd.2015.10.005
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Шарло, К., Вальс, X., Хедревиль, М., Синнапа, С., Лемонн, Н., Этьен-Джулан, М., и соавт. (2015). Нарушение кривой эффективности поглощения кислорода и нетранзиторная кинетика легочного поглощения кислорода при серповидно-клеточной анемии связаны с гемореологическими нарушениями. клин. гемореол. Микроциркуляр. 60, 413–421. doi: 10.3233/CH-141891
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Чаррин, Э., Офрадет, Э., Дуйяр, А., Ромдани, А., Соуза, Г.Д., Бессаад, А., и соавт.(2015). Окислительный стресс снижается у физически активных мышей с серповидно-клеточной анемией. Бр. Дж. Гематол. 168, 747–756. doi: 10.1111/bjh.13207
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Charrin, E., Dube, J.J., Connes, P., Pialoux, V., Ghosh, S., Faes, C., et al. (2018). Умеренные физические упражнения уменьшают воспаление у трансгенных серповидноклеточных мышей. Клетки крови Мол. Дис. 69, 45–52. doi: 10.1016/j.bcmd.2017.06.002
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Шатель, Б., Messonnier, L.A., Barge, Q., Vilmen, C., Noirez, P., Bernard, M., et al. (2018). Тренировки на выносливость снижают вызванный физической нагрузкой ацидоз и улучшают мышечную функцию в мышиной модели серповидно-клеточной анемии. Мол. Жене. Метаб. 123, 400–410. doi: 10.1016/j.ymgme.2017.11.010
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Чиен С., Кинг Р. Г., Скалак Р., Усами С. и Копли А. Л. (1975). Вязкоупругие свойства крови человека и суспензий эритроцитов. Биореология 12, 341–346.
Академия Google
Чиен, С., Усами, С., Делленбак, Р. Дж., и Грегерсен, М. И. (1970). Сдвиг-зависимая деформация эритроцитов в реологии крови человека. утра. Дж. Физиол. 219, 136–142. doi: 10.1152/ajplegacy.1970.219.1.136
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Кирико, Э. Н., Фаес, К., Коннес, П., Кане-Сулас, Э., Мартин, К., и Пьялу, В. (2016). Роль окислительного стресса, вызванного физическими упражнениями, в серповидно-клеточном признаке и заболевании. Спорт Мед. 46, 629–639. doi: 10.1007/s40279-015-0447-z
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Кларк М.Р., Мохандас Н. и Шохет С.Б. (1983). Осмотическая градиентная эктацитометрия: всесторонняя характеристика объема эритроцитов и поддержания поверхности. Кровь 61, 899–910.
Реферат PubMed | Академия Google
Кокелет, Г. Р., и Голдсмит, Х. Л. (1991). Снижение гидродинамического сопротивления при двухфазном течении крови по малым вертикальным трубкам при малых скоростях потока. Обр. Рез. 68, 1–17. doi: 10.1161/01.res.68.1.1
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Кокелет, Г. Р., и Майзельман, Х. Дж. (2007). «Макро- и микрореологические свойства крови», в Справочник по гемореологии и гемодинамике , под редакцией О.К. Баскерт, М.Р. Хардеман, М.В. Рэмплинг и Х.Дж. Мейзельман, (Амстердам: IOS Press), 45–71.
Академия Google
Конн, П. (2010). Гемореология и физические упражнения: влияние теплой окружающей среды и возможные последствия для носителей признаков серповидно-клеточной анемии. Скан. Дж. Мед. науч. Спорт 20 (Прил. 3), 48–52. doi: 10.1111/j.1600-0838.2010.01208.x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Коннес, П., Алекси, Т., Деттерих, Дж., Романа, М., Харди-Дессорс, доктор медицины, и Баллас, С. К. (2016). Роль реологии крови при серповидно-клеточной анемии. Кровь Ред. 30, 111–118. doi: 10.1016/j.blre.2015.08.005
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Конн, П., Bouix, D., Durand, F., Kippelen, P., Mercier, J., Prefaut, C., et al. (2004а). Связана ли десатурация гемоглобина с вязкостью крови у спортсменов во время физических упражнений? Междунар. Дж. Спорт Мед. 25, 569–574.
Реферат PubMed | Академия Google
Connes, P., Bouix, D., Py, G., Caillaud, C., Kippelen, P., Brun, J.F., et al. (2004б). Изменяет ли гипоксемия, вызванная физической нагрузкой, приток лактата в эритроциты и гемореологические параметры у спортсменов? J. Appl. Физиол. 97, 1053–1058.
Реферат PubMed | Академия Google
Connes, P., Bouix, D., Py, G., Prefaut, C., Mercier, J., Brun, J.F., et al. (2004с). Противоположные эффекты лактата in vitro на деформируемость эритроцитов у спортсменов и нетренированных людей. клин. гемореол. Микроциркуляр 31, 311–318.
Академия Google
Конн П., Кайо К., Пи Г., Мерсье Дж., Хью О. и Брюн Дж. Ф. (2007). Максимальные физические нагрузки и лактат не изменяют агрегацию эритроцитов у хорошо тренированных спортсменов. клин. гемореол. Микроциркуляр 36, 319–326.
Реферат PubMed | Академия Google
Коннес, П., Хью, О., Трипетт, Дж., и Харди-Дессорс, доктор медицины (2008). Нарушения реологии крови и механизмы адгезии сосудистых клеток у носителей признаков серповидно-клеточной анемии во время физической нагрузки. клин. гемореол. Микроциркуляр 39, 179–184.
Реферат PubMed | Академия Google
Конн, П., Ламар, Ю., Харди-Дессорс, М. Д., Лемон, Н., Вальс, X., Муженель, Д., и другие. (2013а). Снижение отношения гематокрита к вязкости и повышение уровня лактатдегидрогеназы у пациентов с серповидноклеточной анемией и рецидивирующими язвами нижних конечностей. PLoS One 8:e79680. doi: 10.1371/journal.pone.0079680
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Коннес, П., Симмондс, М.Дж., Брун, Дж.Ф., и Баскурт, О.К. (2013b). Гемореология упражнений: классические данные, недавние открытия и нерешенные вопросы. клин. гемореол. Микроциркуляр 53, 187–199.doi: 10.3233/CH-2012-1643
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Конн, П., Ламар, Ю., Вальс, X., Баллас, С.К., Лемонн, Н., Этьен-Джулан, М., и др. (2014). Гемолиз и патологическая гемореология при серповидноклеточной анемии. Бр. Дж. Гематол. 165, 564–572. doi: 10.1111/bjh.12786
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Коннес П., Мачадо Р., Хью О. и Рид Х. (2011). Ограничение физической нагрузки, тестирование с физической нагрузкой и рекомендации по физической нагрузке при серповидноклеточной анемии. клин. гемореол. Микроциркуляр. 49, 151–163. doi: 10.3233/CH-2011-1465
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Connes, P., Pichon, A., Hardy-Dessources, M.D., Waltz, X., Lamarre, Y., Simmonds, M.J., et al. (2012). Вязкость крови и гемодинамика при физической нагрузке. клин. гемореол. Микроциркуляр. 51, 101–109. doi: 10.3233/CH-2011-1515
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Конн П., Трипетт Дж., Mukisi-Mukaza, M., Baskurt, O.K., Toth, K., Meiselman, H.J., et al. (2009). Взаимосвязь между гемодинамическими, гемореологическими и метаболическими реакциями при физической нагрузке. Биореология 46, 133–143. doi: 10.3233/БИР-2009-0529
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Convertino, V.A., Keil, L.C., Bernauer, E.M., and Greenleaf, J.E. (1981). Объем плазмы, осмоляльность, активность вазопрессина и ренина при дозированных физических нагрузках у мужчин. J. Appl.Физиол. Дыхание Окружающая среда. Упражнение Физиол. 50, 123–128. doi: 10.1152/jappl.1981.50.1.123
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Диау, М., Самб, А., Диоп, С., Салл, Н.Д., Ба, А., Сиссе, Ф., и соавт. (2014). Влияние гидратации и обезвоживания на вязкость крови во время футбольного матча у носителей признаков серповидно-клеточной анемии. Бр. Дж. Спорт Мед. 48, 326–331. doi: 10.1136/bjsports-2012-0
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Догерти, К.А., Шалл, Дж. И., Ровнер, А. Дж., Столлингс, В. А., и Земель, Б. С. (2011). Снижение максимальной мышечной силы и пиковой мощности у детей с серповидно-клеточной анемией. Ж. Педиатр. Гематол. Онкол. 33, 93–97. doi: 10.1097/MPH.0b013e318200ef49
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Эрнст, Э. (1985). Изменения реологии крови, вызванные физической нагрузкой. Дж. Ам. Мед. доц. 253, 2962–2963.
Академия Google
Эрнст, Э., Данбургер, Л., и Сарадет, Т. (1991a). Изменения объема плазмы после продолжительных упражнений на выносливость. Мед. науч. Спортивное упражнение. 23:884.
Академия Google
Эрнст Э., Дабургер Л. и Сарадет Т. (1991b). Кинетика реологии крови во время и после длительной стандартизированной физической нагрузки. Клин Гемореол. 11, 429–439.
Академия Google
Эрнст Э., Матрай А., Ашенбреннер Э., Уилл В. и Шмидлехнер К. (1985). Взаимосвязь между фитнесом и текучестью крови. клин. гемореол. 5, 507–510.
Академия Google
Faes, C., Balayssac-Siransy, E., Connes, P., Hivert, L., Danho, C., Bogui, P., et al. (2014). Умеренные упражнения на выносливость у пациентов с серповидноклеточной анемией: влияние на окислительный стресс и активацию эндотелия. Бр. Дж. Гематол. 164, 124–130. doi: 10.1111/bjh.12594
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Фаес, К., Шаррин, Э., Конн, П., Пиалу, В.и Мартин, К. (2015). Хроническая физическая активность ограничивает изменения реологии крови у трансгенных мышей с САР. утра. Дж. Гематол. 90, Е32–Е33. дои: 10.1002/ajh.23896
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Фишер, Т.М., Штор-Лиссен, М., и Шмид-Шонбейн, Х. (1978). Эритроцит как капля жидкости: движение мембраны эритроцита человека в сдвиговом потоке, похожее на гусеницу. Наука 202, 894–896. doi: 10.1126/science.715448
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Геллен, Б., Messonnier, L.A., Galacteros, F., Audureau, E., Merlet, A.N., Rupp, T., et al. (2018). Тренировки на выносливость средней интенсивности у пациентов с серповидно-клеточной анемией без тяжелых хронических осложнений (EXDRE): открытое рандомизированное контролируемое исследование. Ланцет Гематол. 5, е554–е562. doi: 10.1016/S2352-3026(18)30163-7
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Голдсмит, Х.Л., Франк, Дж.М., и Макинтош, К. (1972). Текучесть эритроцитов.Вращение и деформация в разбавленных суспензиях. Проц. Р. Соц. Б. 182, 351–384.
Академия Google
Гонсалес, Дж. У., Паркер, Б. А., Ридаут, С. Дж., Смитмайер, С. Л., и Проктор, Д. Н. (2009). Реакция скорости сдвига бедренной кости на упражнения для разгибания колена: сравнение возраста и пола. Биореология 46, 145–154. doi: 10.3233/БИР-2009-0535
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Гуро, Э., Шаррин, Э., Дубе, Дж. Дж., Офори-Акуа, С.Ф., Мартин С., Скиннер С. и соавт. (2019). Влияние индивидуальной тренировки на выносливость на беговой дорожке на окислительный стресс в скелетных мышцах трансгенных серповидных мышей. Оксид. Мед. Сотовый Лонгев. 2019:3765643. дои: 10.1155/2019/3765643
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Грау, М., Джерке, М., Надер, Э., Шенк, А., Ренукс, К., Коллинз, Б., и соавт. (2019). Влияние интенсивной физической нагрузки на деформируемость эритроцитов и сигнальный путь синтазы оксида азота эритроцитов у молодых пациентов с серповидноклеточной анемией. науч. Респ. 9:11813. doi: 10.1038/s41598-019-48364-1
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Грау, М., Поли, С., Али, Дж., Вальпургис, К., Тевис, М., Блох, В., и др. (2013). RBC-NOS-зависимое S-нитрозилирование белков цитоскелета улучшает деформируемость эритроцитов. PLoS One 8:e56759. doi: 10.1371/journal.pone.0056759
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Геген-Дюшен, М., Дюран, Ф., Beillot, J., Dezier, J., Rochcongar, P., Legoff, M., et al. (1987). Могут ли максимальные физические нагрузки быть гемореологическим фактором риска? клин. гемореол. 7, 418.
Академия Google
Хаким, Т. С. (1988). Деформируемость эритроцитов и сегментарное легочное сосудистое сопротивление: осмолярность и термообработка. J. Appl. Физиол. 65, 1634–1641. doi: 10.1152/jappl.1988.65.4.1634
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Хеббель, Р.П., Осарогиагбон Р. и Каул Д. (2004). Эндотелиальная биология серповидноклеточной анемии: воспаление и хроническая васкулопатия. Микроциркуляция 11, 129–151.
Реферат PubMed | Академия Google
Isbister, JP (1997). Физиология и патофизиология регуляции объема крови. Трансфус. науч. 18, 409–423.
Реферат PubMed | Академия Google
Като, Г.Дж., Гладвин, М.Т., и Стейнберг, М.Х. (2007). Деконструкция серповидноклеточной анемии: переоценка роли гемолиза в развитии клинических субфенотипов. Кровь Ред. 21, 37–47. doi: 10.1016/j.blre.2006.07.001
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Кесмарки, Г., Кеньерес, П., Рабаи, М., и Тот, К. (2008). Вязкость плазмы: забытая переменная. клин. гемореол. Микроциркуляр. 39, 243–246.
Реферат PubMed | Академия Google
Халифа А., Халифа А. А., Акбарпур М., Коннес П., Романа М., Лаппинг-Карр Г. и соавт. (2016). Внеклеточные микровезикулярные микроРНК у детей с серповидноклеточной анемией с различными клиническими фенотипами. Бр. Дж. Гематол. 174, 786–798. doi: 10.1111/bjh.14104
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Килич-Топрак Э., Ардич Ф., Эркен Г., Унвер-Коджак Ф., Кучукатай В. и Бор-Кучукатай М. (2012). Гемореологические реакции на прогрессивные тренировки с отягощениями у здоровых молодых мужчин. Мед. науч. Монит. 18, CR351–CR360. doi: 10.12659/msm.882878
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Клейнбонгард, П., Schulz, R., Rassaf, T., Lauer, T., Dejam, A., Jax, T., et al. (2006). Эритроциты экспрессируют функциональную эндотелиальную синтазу оксида азота. Кровь 107, 2943–2951. doi: 10.1182/blood-2005-10-3992
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ко Э., Юн Дж. М., Пак Х. С., Сонг М., Кох К. Х. и Лим Ч. Х. (2018). Ранние аномалии эритроцитов как клиническая переменная в диагностике сепсиса. клин. гемореол. Микроциркуляр. 70, 355–363.DOI: 10.3233/CH-180430
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Lamarre, Y., Romana, M., Lemonne, N., Hardy-Dessources, M.D., Tarer, V., Mougenel, D., et al. (2014). Альфа-талассемия защищает пациентов с серповидно-клеточной анемией от макроальбуминурии благодаря своему влиянию на реологические свойства эритроцитов. клин. гемореол. Микроциркуляр. 57, 63–72. DOI: 10.3233/CH-131772
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ламарр, Ю., Romana, M., Waltz, X., Lalanne-Mistrih, M.L., Tressieres, B., Divialle-Doumdo, L., et al. (2012). Гемореологические факторы риска острого грудного синдрома и болевого вазоокклюзионного криза у детей с серповидно-клеточной анемией. Гематология 97, 1641–1647. doi: 10.3324/гематол.2012.066670
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ланотте, Л., Мауэр, Дж., Мендес, С., Федосов, Д.А., Фроменталь, Дж.М., Клавериа, В., и соавт. (2016). Динамическая морфология эритроцитов определяет разжижение крови при сдвиге в условиях микроциркуляторного русла. Проц. Натл. акад. науч. США 113, 13289–13294. doi: 10.1073/pnas.1608074113
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Лапумерули, К., Конн, П., Эль Хосс, С., Йерсо, Р., Шарло, К., Лемонн, Н., и другие. (2019). Новое понимание реологии и адгезии эритроцитов у пациентов с серповидноклеточной анемией во время вазоокклюзионных кризов. Бр. Дж. Гематол. 185, 991–994. doi: 10.1111/bjh.15686
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Лоранс, С., Lansiaux, P., Pellay, F.X., Hauchecorne, M., Benecke, A., Elion, J., et al. (2011). Дифференциальная модуляция экспрессии молекул адгезии гидроксикарбамидом в эндотелиальных клетках человека из микро- и макроциркуляции: возможные последствия вазоокклюзионных событий серповидно-клеточной анемии. Haematologica 96, 534–542. doi: 10.3324/гематол.2010.026740
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Лемон, Н., Шарло, К., Вальс, X., Баллас, С.К., Ламарр Ю., Ли К. и др. (2015). Лечение гидроксимочевиной не увеличивает вязкость крови и улучшает реологию эритроцитов при серповидноклеточной анемии. Гематологический 100, e383–e386. doi: 10.3324/гематол.2015.130435
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Лемонн, Н., Конн, П., Романа, М., Вент-Шмидт, Дж., Бурхис, В., Ламарре, Ю., и др. (2012). Повышенная вязкость крови и агрегация эритроцитов у больного серповидноклеточной анемией и вялотекущей миеломой. утра. Дж. Гематол. 87:Е129. doi: 10.1002/ajh.23312
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Лемон, Н., Ламар, Ю., Романа, М., Мукиси-Муказа, М., Харди-Дессорс, М. Д., Тарер, В., и соавт. (2013). Повышает ли повышенная деформируемость эритроцитов риск остеонекроза при серповидноклеточной анемии? Кровь 121, 3054–3056. doi: 10.1182/blood-2013-01-480277
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Лием, Р.I., Reddy, M., Pelligra, S.A., Savant, A.P., Fernhall, B., Rodeghier, M., et al. (2015). У детей и молодых людей с серповидно-клеточной анемией сниженная физическая форма и аномальные сердечно-легочные реакции на максимальные физические нагрузки. Физиол. Представитель 3:e12338. дои: 10.14814/phy2.12338
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Липовац В., Гавелла М., Турк З. и Скрабало З. (1985). Влияние лактата на действие инсулина на фильтруемость эритроцитов. клин. гемореол. 5, 421–428.
Академия Google
Мартин, К., Пиалоу, В., Фаес, К., Чаррин, Э., Скиннер, С., и Конн, П. (2018). Увеличивает или снижает физическая активность риск осложнений серповидно-клеточной анемии? Бр. Дж. Спорт Мед. 52, 214–218. doi: 10.1136/bjsports-2015-095317
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Мартини, Дж., Карпентье, Б., Негрете, А.С., Франгос, Дж.А., и Интальетта, М.(2005). Парадоксальная гипотензия после повышения гематокрита и вязкости крови. утра. Дж. Физиол. Цирк Сердца. Физиол. 289, h3136–h3143.
Реферат PubMed | Академия Google
Мейзельман, Х. Дж., Ной, Б., Рэмплинг, М. В., и Баскурт, О. К. (2007). Агрегация эритроцитов: лабораторные данные и модели. Индийский J. Exp. биол. 45, 9–17.
Реферат PubMed | Академия Google
Мерле, А. Н., Шатель, Б., Урд, К., Равелохаона, М., Бендахан, Д., Feasson, L., et al. (2019). Как серповидно-клеточная анемия нарушает функцию скелетных мышц: последствия в повседневной жизни. Мед. науч. Спортивное упражнение. 51, 4–11. doi: 10.1249/MSS.0000000000001757
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Моккеш, Б., Конн, П., Шарло, К., Скиннер, С., Харди-Дессорс, М. Д., Романа, М., и соавт. (2017). Связь между окислительным стрессом и сосудистой реактивностью у детей с серповидноклеточной анемией и серповидноклеточной болезнью гемоглобина С. Бр. Дж. Гематол. 178, 468–475. doi: 10.1111/bjh.14693
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Nader, E., Connes, P., Lamarre, Y., Renoux, C., Joly, P., Hardy-Dessources, M.D., et al. (2017). Плазмаферез может улучшить клиническое состояние при серповидно-клеточной анемии благодаря его влиянию на реологию эритроцитов. утра. Дж. Гематол. 92, Е629–Е630. doi: 10.1002/ajh.24870
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Надер, Э., Guillot, N., Lavorel, L., Hancco, I., Fort, R., Stauffer, E., et al. (2018). Эриптоз и гемореологические реакции на максимальные физические нагрузки у спортсменов: сравнение бега и езды на велосипеде. Скан. Дж. Мед. науч. Спорт 28, 1532–1540. doi: 10.1111/смс.13059
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Небор, Д., Бауэрс, А., Харди-Дессорс, М.Д., Найт-Мэдден, Дж., Романа, М., Рид, Х., и соавт. (2011). Частота болевых кризов при серповидно-клеточной анемии и ее связь с симпато-вагусным балансом, вязкостью крови и воспалением. Haematologica 96, 1589–1594. doi: 10.3324/гематол.2011.047365
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Нейхаус, Д., Бен, К., и Гетгенс, П. (1992). Гемореология и физические упражнения: внутренние свойства кровотока при марафонском беге. Междунар. Дж. Спорт Мед. 13, 506–511. doi: 10.1055/s-2007-1021307
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Носадова, Дж. (1977). Изменения гематокрита, гемоглобина, объема плазмы и белков во время и после различных видов физической нагрузки. евро. Дж. Заявл. Физиол. 36, 223–230.
Академия Google
Omwanghe, O.A., Muntz, D.S., Kwon, S., Montgomery, S., Kemiki, O., Hsu, L.L., et al. (2017). Самооценка физической активности и моделей упражнений у детей с серповидно-клеточной анемией. Педиатр. Упражнение науч. 29, 388–395. doi: 10.1123/pes.2016-0276
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Остенбруг, Г. С., Менсинк, Р. П., Хардеман, М. Р., Де Врис, Т., Браунс Ф. и Хорнстра Г. (1997). Упражнения, деформируемость эритроцитов и перекисное окисление липидов: эффекты рыбьего жира и витамина Е. J. Appl. Физиол. 83, 746–752.
Реферат PubMed | Академия Google
Паллис, Ф. Р., Конран, Н., Фертрин, К. Ю., Олалла Саад, С. Т., Коста, Ф. Ф., и Франко-Пентеадо, К. Ф. (2014). Гидроксикарбамид уменьшает адгезию эозинофилов и дегрануляцию у пациентов с серповидноклеточной анемией. Бр. Дж. Гематол. 164, 286–295.doi: 10.1111/bjh.12628
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Партасарати, К., и Липовски, Х.Х. (1999). Рекрутирование капилляров в ответ на тканевую гипоксию и его зависимость от деформируемости эритроцитов. утра. Дж. Физиол. 277, h3145–h3157. doi: 10.1152/ajpheart.1999.277.6.h3145
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Пекух, Й., Мертас, А., Нововейска-Вевера, А., Зуравель, Р., Грегорчин, С., Czuba, Z., et al. (2019). Взаимосвязь между реологическим поведением эритроцитов и ангиогенезом у пациентов с патологическим ожирением. клин. гемореол. Микроциркуляр. 71, 95–102. doi: 10.3233/CH-180420
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Piel, F.B., Patil, A.P., Howes, R.E., Nyangiri, O.A., Gething, P.W., Williams, T.N., et al. (2010). Глобальное распространение гена серповидноклеточной анемии и географическое подтверждение малярийной гипотезы. Нац.коммун. 1:104. doi: 10.1038/ncomms1104
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Плоутц-Снайдер, Л.Л., Конвертино, В.А., и Дадли, Г.А. (1995). Сдвиги жидкости, вызванные упражнениями с отягощениями: изменение активного размера мышц и объема плазмы. утра. Дж. Физиол. 269, R536–R543.
Реферат PubMed | Академия Google
Poiseuille, JLM (1835 г.). Recherches сюр ле причин дю движения дю пела данс ле vaisseaux capillaires. С Р Академ. науч. Париж 1, 554–560.
Академия Google
Поп, Г. А., Дункер, Д. Дж., Гардиен, М., Вранкс, П., Верслуис, С., Хасан, Д., и соавт. (2002). Клиническое значение вязкости цельной крови в (сердечно)сосудистой медицине. Нет. Heart J. 10, 512–516.
Реферат PubMed | Академия Google
Радж, Дж. У., Каапа, П., Хиллард, Р., и Андерсон, Дж. (1991). Профиль легочного сосудистого давления у взрослых хорьков: измерения in vivo и в изолированных легких. Acta Physiol. Сканд. 142, 41–48. doi: 10.1111/j.1748-1716.1991.tb09126.x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Рэмплинг М.В., Майзельман Х.Дж., Ной Б. и Баскурт О.К. (2004). Влияние клеточно-специфических факторов на агрегацию эритроцитов. Биореология 41, 91–112.
Реферат PubMed | Академия Google
Рейнхарт, У. Х., Штаубли, М., и Штрауб, П. В. (1983). Нарушение фильтруемости эритроцитов с элиминацией старых эритроцитов во время забега на 100 км. J. Appl. Физиол. Дыхание Окружающая среда. Упражнение Физиол. 54, 827–830. doi: 10.1152/jappl.1983.54.3.827
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Renoux, C., Connes, P., Nader, E., Skinner, S., Faes, C., Petras, M., et al. (2017). Альфа-талассемия способствует частым вазоокклюзионным кризам у детей с серповидноклеточной анемией за счет гемореологических изменений. Педиатр. Рак крови 64:e26455. doi: 10.1002/pbc.26455
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ренукс, К., Faivre, M., Bessaa, A., Da Costa, L., Joly, P., Gauthier, A., et al. (2019). Влияние отношения площади поверхности к объему, внутренней вязкости и вязкоупругости мембраны на деформируемость эритроцитов, измеренное в изотоническом состоянии. науч. Респ. 9:6771. doi: 10.1038/s41598-019-43200-y
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Renoux, C., Romana, M., Joly, P., Ferdinand, S., Faes, C., Lemonne, N., et al. (2016). Влияние возраста на реологию крови при серповидноклеточной анемии и серповидноклеточной гемоглобиновой болезни С: перекрестное исследование. PLoS One 11:e0158182. doi: 10.1371/journal.pone.0158182
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Робах, П., Буассон, Р. К., Винсент, Л., Лундби, К., Мутеро, С., Гержель, Л., и соавт. (2014). Гемолиз, вызванный экстремальным горным ультрамарафоном, не связан с уменьшением общего объема эритроцитов. Скан. Дж. Мед. науч. Виды спорта. 24, 18–27. doi: 10.1111/j.1600-0838.2012.01481.x
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ромен, А.Дж., Брун, Дж. Ф., Варле-Мари, Э., и Рейно де Моверже, Э. (2011). Влияние физических упражнений на реологию крови: метаанализ. клин. гемореол. Микроциркуляр. 49, 199–205. doi: 10.3233/CH-2011-1469
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Салазар Васкес, Б.Ю., Кабралес, П., Цай, А.Г., и Интальетта, М. (2011). Нелинейная регуляция сердечно-сосудистой системы вследствие изменения вязкости крови. клин. гемореол. Микроциркуляр. 49, 29–36.doi: 10.3233/CH-2011-1454
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Сандор Б., Надь А., Тот А., Рабаи М., Мезей Б., Чато А. и др. (2014). Влияние умеренной аэробной тренировки на гемореологические и лабораторные показатели у больных ишемической болезнью сердца. PLoS One 9:e110751. doi: 10.1371/journal.pone.0110751
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Шмид-Шонбейн, Х., Уэллс, Р.Э. и Голдстоун Дж. (1969). Модельные эксперименты по реологии эритроцитов. Пфлюгеры. Арка 312, Р39–Р40.
Академия Google
Сентюрк, У.К., Гундуз, Ф., Куру, О., Кочер, Г., Озкая, Ю.Г., Есилкая, А., и соавт. (2005а). Окислительный стресс, вызванный физическими упражнениями, приводит к гемолизу у малоподвижных, но не тренированных людей. J. Appl. Физиол. 99, 1434–1441.
Реферат PubMed | Академия Google
Сентурк, У.К., Ялчин, О., Гундуз, Ф., Куру, О., Meiselman, HJ, and Baskurt, O.K. (2005b). Влияние лечения антиоксидантными витаминами на динамику гематологических и гемореологических изменений после эпизода изнурительной физической нагрузки у людей. J. Appl. Физиол. 98, 1272–1279.
Реферат PubMed | Академия Google
Шереметьев Ю.А., Поповичева А.Н., Рогозин М.М., Левин Г.Ю. (2019). Агрегация, дезагрегация и морфология эритроцитов в аутологичной плазме и сыворотке при диабетической стопе. клин. гемореол. Микроциркуляр. 72, 221–227. doi: 10.3233/CH-180405
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Sjogaard, G., Adams, R.P., and Saltin, B. (1985). Водно-ионные сдвиги в скелетных мышцах человека при интенсивном динамическом разгибании колена. утра. Дж. Физиол. 248, Р190–Р196.
Реферат PubMed | Академия Google
Смит, Дж. А., Мартин, Д. Т., Телфорд, Р. Д., и Баллас, С. К. (1999). Повышенная деформируемость эритроцитов у спортсменов на выносливость мирового класса. утра. Дж. Физиол. 276, h3188–h3193. doi: 10.1152/ajpheart.1999.276.6.h3188
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Smith, J.A., Telford, R.D., Kolbuch-Braddon, M., and Weidemann, M.J. (1997). Поглощение лактата/Н+ красными кровяными тельцами во время физических упражнений изменяет их физические свойства. евро. Дж. Заявл. Физиол. Занять. Физиол. 75, 54–61.
Реферат PubMed | Академия Google
Шрирам К., Салазар Васкес Б.Ю., Цай А.Г., Кабралес П., Интальетта М. и Тартаковский Д.М. (2012). Ауторегуляция и механотрансдукция контролируют реакцию артериол на небольшие изменения гематокрита. утра. Дж. Физиол. Цирк Сердца. Физиол. 303, h2096–h2106. doi: 10.1152/ajpheart.00438.2012
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Старзик Д., Корбут Р. и Грыглевски Р. Дж. (1997). Роль оксида азота в регуляции деформируемости эритроцитов в острой фазе эндотоксемии у крыс. J. Physiol. Фармакол. 48, 731–735.
Реферат PubMed | Академия Google
Стефенсон, Л.А., и Колка, Массачусетс (1988). Объем плазмы при тепловом стрессе и физической нагрузке у женщин. евро. Дж. Заявл. Физиол. Занять. Физиол. 57, 373–381.
Реферат PubMed | Академия Google
Зур Ф., Брениг Дж., Мюллер Р., Беренс Х., Блох В. и Грау М. (2012). Умеренные физические нагрузки повышают активность RBC-NOS человека, выработку NO и деформируемость посредством пути киназы Akt. PLoS One 7:e45982. doi: 10.1371/journal.pone.0045982
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Tomschi, F., Bizjak, D., Bloch, W., Latsch, J., Predel, HG, and Grau, M. (2018). Деформируемость различных популяций эритроцитов и вязкость разнотренированных юношей в ответ на интенсивный и умеренный бег. клин. гемореол. Микроциркуляр. 69, 503–514. DOI: 10.3233/CH-189202
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Тоцимон, К., Биро К., Сабо З. Э., Тот К., Кеньерес П. и Мартон З. (2017). Взаимосвязь между гемореологическими показателями и смертностью у больных в критическом состоянии с сепсисом и без него. клин. гемореол. Микроциркуляр. 65, 119–129. doi: 10.3233/CH-16136
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Трипетт, Дж., Алекси, Т., Харди-Дессорс, М.Д., Мугенель, Д., Белтан, Э., Чалаби, Т., и соавт. (2009). Агрегация эритроцитов, их агрегатная сила и кислородный транспортный потенциал крови ненормальны как при гомозиготной серповидно-клеточной анемии, так и при серповидно-гемоглобиновой болезни С. Haematologica 94, 1060–1065. doi: 10.3324/гематол.2008.005371
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Tripette, J., Hardy-Dessources, M.D., Beltan, E., Sanouiller, A., Bangou, J., Chalabi, T., et al. (2011). Испытание на выносливость в условиях тропиков: реологическое исследование крови. клин. гемореол. Микроциркуляр 47, 261–268. doi: 10.3233/CH-2011-1388
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Трипетт, Дж., Локо Г., Самб А., Гог Б.Д., Севаде Э., Сек Д. и др. (2010). Влияние гидратации и обезвоживания на реологию крови у носителей признаков серповидно-клеточной анемии во время физических упражнений. утра. Дж. Физиол. Цирк Сердца. Физиол. 299, H908–H914. doi: 10.1152/ajpheart.00298.2010
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Tsai, A.G., Acero, C., Nance, P.R., Cabrales, P., Frangos, J.A., Buerk, D.G., et al. (2005). Повышенная вязкость плазмы при экстремальной гемодилюции увеличивает периваскулярную концентрацию оксида азота и микроваскулярную перфузию. утра. Дж. Физиол. Цирк Сердца. Физиол. 288, h2730–h2739. doi: 10.1152/ajpheart.00998.2004
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Ван Бомонт, В., Ундеркофлер, С., и Ван Бомонт, С. (1981). Объем эритроцитов, объем плазмы и кислотно-щелочные изменения при физических нагрузках и тепловой дегидратации. J. Appl. Физиол. Дыхание Окружающая среда. Упражнение Физиол. 50, 1255–1262. doi: 10.1152/jappl.1981.50.6.1255
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Вандевалле, Х., Lacombe, C., Lelievre, J.C., and Poirot, C. (1988). Вязкость крови после 1-часовой субмаксимальной нагрузки с питьем и без него. Междунар. Дж. Спорт Мед. 9, 104–107.
Реферат PubMed | Академия Google
Варле-Мари, Э., Годар, А., Моннье, Дж. Ф., Микаллеф, Дж. П., Мерсье, Дж., Брессоль, Ф., и др. (2003). Снижение дезагрегации эритроцитов во время субмаксимальных упражнений: связь с уровнями фибриногена. клин. гемореол. Микроциркуляр 28, 139–149.
Реферат PubMed | Академия Google
Васкес, Б.Ю., Васкес, М.А., Жакес, М.Г., Хьюмеллер, А.Х., Интальетта, М., и Кабралес, П. (2010). Артериальное давление напрямую коррелирует с вязкостью крови у детей с диабетом 1 типа, но не у здоровых людей. клин. гемореол. Микроциркуляр 44, 55–61. doi: 10.3233/CH-2010-1252
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Верже, Э., Шоварт, Д., Карривен, П., Виктор, Дж. М., Лапумерули, К.и Элион, Дж. (2014). Предварительное воздействие гидроксикарбамида на эндотелиальные клетки изменяет динамику потока и адгезию серповидных эритроцитов. клин. гемореол. Микроциркуляр 57, 9–22. doi: 10.3233/CH-131762
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Вальс, X., и Конн, П. (2014). Патофизиология и физическая активность у больных серповидноклеточной анемией. Мов. Спортивная наука. науч. Мотрисите 83, 41–47. doi: 10.1051/sm/2013105
Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google
Вальс, Х., Hardy-Dessources, M.D., Lemonne, N., Mougenel, D., Lalanne-Mistrih, M.L., Lamarre, Y., et al. (2015). Существует ли связь между отношением гематокрита к вязкости и оксигенацией микрососудов в головном мозге и мышцах? клин. гемореол. Микроциркуляр. 59, 37–43. doi: 10.3233/CH-131742
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Вальс, X., Хедревиль, М., Синнапа, С., Ламарр, Ю., Сотер, В., Лемонн, Н., и другие. (2012). Отсроченный положительный эффект интенсивной физической нагрузки на агрегатную силу эритроцитов у пациентов с серповидноклеточной анемией. клин. гемореол. Микроциркуляр. 52, 15–26. doi: 10.3233/CH-2012-1540
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Вальс, X., Романа, М., Лаланн-Мистрих, М.Л., Мачадо, Р.Ф., Ламарре, Ю., Тарер, В., и др. (2013). Гематологические и гемореологические детерминанты десатурации гемоглобина кислородом в покое и при физической нагрузке у детей с серповидноклеточной анемией. Haematologica 98, 1039–1044. doi: 10.3324/гематол.2013.083576
Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google
Вуд, С.С., Дойл, М.П., и Аппенцеллер, О. (1991). Влияние тренировок на выносливость и бега на длинные дистанции на вязкость крови. Мед. науч. Спортивное упражнение. 23, 1265–1269.
Реферат PubMed | Академия Google
Ялчин, О., Бор-Кучукатай, М., Сентурк, У.К., и Баскурт, О.К. (2000). Влияние плавательных упражнений на реологию эритроцитов у тренированных и нетренированных крыс. J. Appl. Физиол. 88, 2074–2080.
Реферат PubMed | Академия Google
Ялчин О., Эрман А., Муратли С., Бор-Кучукатай М. и Баскурт О.К. (2003). Динамика гемореологических изменений после тяжелых анаэробных упражнений у нетренированных людей. J. Appl. Физиол. 94, 997–1002.
Реферат PubMed | Академия Google
Ялчин, О., Майзельман, Х.Дж., Армстронг, Дж.К., и Баскурт, О.К. (2005). Влияние повышенной агрегации эритроцитов на сопротивление кровотоку в препарате сердца морской свинки с изолированной перфузией. Биореология 42, 511–520.
Реферат PubMed | Академия Google
Отправьте справку о состоянии здоровья | Студенческая служба Университета Говарда
В качестве студента-медика часть вашего обучения будет включать непосредственный контакт с пациентами. Действительно, это захватывающее время в вашем клиническом обучении. Вы обязаны защитить себя и других от инфекционных заболеваний. Одной из обязанностей университета является создание среды, сводящей к минимуму риск заражения болезнями, которые можно предотвратить с помощью вакцинации.Существуют и другие технические средства контроля, которые используются для защиты вас и других, например. испытание респираторов на прилегание, универсальные меры предосторожности.
Требования к медицинскому освидетельствованию
Обязательные медицинские требования
Официальные лабораторные результаты , подтверждающие иммунитет к MMR, гепатиту B и ветряной оспе. Мы не принимаем рукописные результаты.
Убедитесь, что вы правильно прошли обследование на туберкулез! Вам необходимо пройти тест Two Step PPD (2 кожных теста в течение 7–21 дня).Если вы выбрали анализ крови или рентген, вы ДОЛЖНЫ предоставить официальные результаты лабораторных исследований или рентгенографический отчет вместе со своими формами. Мы не принимаем рукописные результаты.
Хронометраж
Учащиеся несут ответственность за то, чтобы медицинское освидетельствование было сделано заблаговременно до того времени, когда оно необходимо. Не ждите до последней минуты, потому что для медицинского освидетельствования обычно требуется тест на туберкулез и другие обычные анализы крови, а в некоторых случаях и анализ мочи на наркотики.Пожалуйста, приходите на эти тесты за неделю или две до физического осмотра. Если вы не явитесь в медицинский центр заранее, это может привести к задержке получения медицинской справки. Это приведет к позднему началу клинической ротации.
В целях вашей безопасности от каждого студента, изучающего медицинские науки, требуется медицинская справка. Это медицинское освидетельствование пересматривается ежегодно, начиная с года начала любой клинической ротации. Некоторые из вас начинают свою клиническую ротацию на первом курсе, другие — на втором или третьем. Ни один студент не будет допущен к клинической ротации, пока не будут выполнены все требования.